两种基因捕获突变小鼠ES细胞库的建立及adiponutrin基因功能研究

摘要

本研究利用基因捕获与polyA捕获相结合的方法，设计并构建两种新型基因捕获载体，并通过电转化方法获得大量小鼠突变ES细胞克隆，对其中部分克隆进行突变位点鉴定，建立了产生大规模位点明确的突变小鼠胚胎干细胞(ES)库和筛选发育相关基因的方法；构建了新基因adiponutrin基因打靶载体，并在小鼠ES细胞进行基因打靶，以期获得同源重组克隆并进一步建立knockout小鼠模型进行adiponutrin基因功能在体研究；利用3T3-L1细胞系和pGL3报告载体系统，建立了人adiponutrin基因调控区载体系列及稳定转染细胞系，通过观察3T3-L1向成熟脂肪细胞分化过程中报告基因的表达特点，确定了adiponutrin基因调控区范围及顺式作用元件所在范围；本研究还建立了潮霉素和新霉素双抗性转基因小鼠。

目录

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摘要

第一部分两种基因捕获突变ES细胞库的建立

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分adiponutrin基因功能研究

前言

实验一adiponutrin基因打靶载体的构建及ES细胞系的筛选

实验二adiponutrin基因转录调控区分析

参考文献

第三部分潮霉素和新霉素抗性基因转基因小鼠的建立及其表达研究

前言

实验材料

实验方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述 基因捕获技术

致谢

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