补肾活血法对高糖条件下RGCs与视网膜Müller细胞膜稳定性影响的实验研究

摘要

目的:观察补肾活血法对共同培养的RGCs与视网膜Müller细胞在高糖条件下的保护作用，并对其作用机制进行初步探讨。
　　方法:1.用出生后7d的SD大鼠以改进的酶消化法培养视网膜Müller细胞；用出生后1d的SD大鼠视网膜细胞悬液，分别经抗大鼠信号调节蛋白（CD172G）单克隆抗体、抗大鼠Thy-1.1单克隆抗体两步筛选，得到纯化的RGCs；将RGCs接种于纯化培养的视网膜Müller细胞上建立RGCs与视网膜Müller细胞共同培养模型。2.将共同培养的RGCs与视网膜Müller细胞分别置于稳定高糖、糖波动及正常条件下进行培养，并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、正常中药干预组，稳定高糖组、稳定高糖中药干预组，糖波动组、糖波动中药干预组。3.在实验干预24h、48h及72h三个时间段采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别对细胞外液进行谷氨酰胺合成酶（GS）、乳酸脱氢酶（LDH）活性的测定，SPSS17.0对所得数据进行统计学分析。
　　结果:
　　1.稳定髙糖组、糖波动组24h及72h时段的LDH漏出量均较正常对照组增加（Ｐ<0.05）；稳定髙糖组的LDH漏出量在72h时段明显增加，与48h比较其差异有统计学意义（Ｐ<0.05）；糖波动组24h时段的LDH漏出量较同时段稳定髙糖组增加（Ｐ<0.05）。在24h、72h时段稳定髙糖中药干预组的LDH漏出量均较稳定髙糖组降低，其差异有统计学意义（Ｐ<0.05）；在24h时段糖波动中药干预组的LDH漏出量较糖波动组减少，其差异有统计学意义（Ｐ<0.05）；糖波动中药干预组的LDH漏出量72h较48h减少，其差异有统计学意义（Ｐ<0.05）。
　　2.糖波动组48h及72h时段GS活性均较正常对照组明显降低，其差异均有统计学意义（Ｐ<0.05）；稳定髙糖组、糖波动组的GS活性在48h均明显增高，与24h比较其差异有统计学意义（Ｐ<0.05）；72h时稳定髙糖组的GS活性仍增高，与48h比较其差异有统计学意义（Ｐ<0.05），而糖波动组的GS活性明显降低，与48h比较其差异有统计学意义（Ｐ<0.05）；糖波动组各时间段的GS活性均较同时段稳定髙糖组明显降低，其差异均有统计学意义（Ｐ<0.05）。稳定髙糖中药干预组的GS活性在48h明显增高，与其24h比较其差异有统计学意义（Ｐ<0.05）；糖波动中药干预组24h、72h时段的GS活性均较同时段糖波动组增高，其差异均有统计学意义（Ｐ<0.05）。
　　结论:
　　1.稳定髙糖及糖波动条件下共同培养的RGCs与视网膜Müller细胞细胞活力降低，细胞膜稳定性下降，补肾活血中药含药血清可增强RGCs与视网膜Müller细胞细胞活力，降低细胞膜通透性。
　　2.糖波动条件下共同培养的视网膜Müller细胞的GS活性明显降低，补肾活血中药含药血清可使糖波动条件下视网膜Müller细胞的GS活性增高，Glu清除速率增加，从而发挥对RGCs与视网膜Müller细胞的保护作用，这可能是补肾活血中药复方防治DR的药物干预途径之一。
　　3.补肾活血中药含药血清能提高本实验中糖波动条件下视网膜Müller细胞GS活性的作用机制之一可能是通过增强RGCs与视网膜Müller细胞细胞活力，从而提高视网膜Müller细胞GS活性，这可能是补肾活血中药复方防治DR的另一药物干预途径。

目录

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缩略词表

目录

1.引言

2.材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计分析方法

3．结果与分析

3.1 RGCs、视网膜Müller细胞鉴定结果

3.2 补肾活血中药含药血清对RGCs与视网膜Müller细胞的LDH漏出量的影响

4.讨论

4.1 立题依据

4.2 RGCs与视网膜Müller细胞共同培养方法的选择

4.3 补肾活血中药含药血清对稳定髙糖及糖波动条件下RGCs与视网膜Müller细胞的LDH活力的影响及机理初步研究

4.4 补肾活血中药含药血清对稳定髙糖及糖波动条件

5. 结论

6. 问题与展望

致谢

参考文献

附图

综述

1 概述

2 细胞髙糖损伤模型的葡萄糖浓度

3 展望

参考文献：

附件一

附件二