电针对面神经损伤修复的雪旺细胞形态学及CNTF表达影响的研究

摘要

目的:
　　本研究在针灸治疗面神经损伤疗效肯定的基础上，探讨针灸对面神经损伤修复中雪旺细胞的形态及睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）表达水平的影响，以期为电针治疗本病的临床应用提供坚实的理论依据。
　　方法:
　　选日本大耳白兔60只，雌雄各半，按性别、体重随机分为:对照组6只、假手术组、模型组、电针组各18只。模型制备采用面神经压榨法，腧穴选取患侧地仓、颊车、翳风及合谷，电针组每次治疗30分钟，每日一次，5次一个疗程，疗程之间间隔2天，共治疗3个疗程。各组分别于每个疗程结束后切取受损面神经，运用光镜、电镜观察面神经纤维、髓鞘及雪旺细胞的形态学改变，并采用免疫组化及原位杂交法检测CNTF蛋白及其mRNA的表达水平。
　　结果:
　　1.组织形态学结果:光镜、电镜下，对照组神经束、雪旺细胞结构完整，细胞器丰富。模型组出现不同程度的充血水肿、脱髓鞘，雪旺细胞结构不完整，胞浆内细胞器缺失。假手术组神经纤维水肿、脱髓鞘程度轻于模型组同期水平，3个疗程内面神经损伤修复基本完成。电针组面神经充血水肿情况较轻，髓鞘及雪旺细胞结构较完整。
　　2.髓鞘定量分析结果:1个疗程后，模型组髓鞘完全崩解，无完整髓鞘，第2、3疗程后，模型组出现不规则髓鞘，髓鞘数目及厚度与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01，P＜0.01)。假手术组在1个疗程时，髓鞘数目及厚度与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)，至3个疗程时髓鞘数目及厚度接近正常水平，与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。1个疗程后，电针组髓鞘数目及厚度与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），至2个疗程时电针组髓鞘厚度仍明显优于模型组(P＜0.01)，稍后髓鞘数目及厚度有所减少，至3个疗程时，髓鞘数目少于模型组(P＜0.05)，髓鞘厚度与模型组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　3.CNTF蛋白表达结果:对照组CNTF表达呈低水平。模型组CNTF蛋白表达水平显著高于对照组(P＜0.01)，至2个疗程时表达至峰值。1个疗程后，电针组CNTF蛋白表达水平低于模型组(P＜0.05)，稍后其表达逐渐增强，至3个疗程时，电针组CNTF蛋白表达水平高于模型组(P＜0.01)。
　　4.CNTFmRNA表达结果:对照组CNTFmRNA表达呈低水平。模型组CNTFmRNA的表达水平显著高于对照组(P＜0.01)，至2个疗程时表达至峰值。1个疗程后，电针组CNTF mRNA的表达水平显著低于模型组(P＜0.01)，稍后表达水平逐渐增强，至3个疗程时，电针组CNTFmRNA表达水平与模型组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.急性期电针刺激可加快面神经损伤修复进程，促进髓鞘及雪旺细胞形态恢复正常。
　　2.CNTF蛋白及mRNA的表达与面神经损伤程度呈正相关。面神经损伤后，电针可迅速将CNTF蛋白及其mRNA的表达调节至正常水平。
　　3.电针效应与刺激量大小不呈正相关，电针过度刺激可能会引发损伤反应，应注意把握“中病即止”的原则。

目录

摘要

中英文缩略词表

引言

实验1 电针对面神经损伤修复的雪旺细胞形态学影响的研究

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

2 实验方法

2．1 动物分组

2．2 模型的建立

2．3 模型成功的评估

2．4 处理方法

2．5 电针治疗

2．6 取材

2．7 观察指标及检测方法

2．8 统计方法

3 实验结果

3．1 实验兔大体情况

3．2 组织病理切片观测面神经纤维形态的改变

3．3 电镜下雪旺细胞及髓鞘形态的改变

实验2 电针对面神经损伤修复CNTF表达影响的研究

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

2 实验方法

2．1 动物分组

2．2 模型的建立

2．3 处理方法

2．4 电针治疗

2．5 取材

2．6 观察指标及检测方法

2．7 统计方法

3 实验结果

3．1 电针刺激对面神经损伤后CNTF表达的影响

3．2 电针刺激对面神经损伤后CNTFmRNA表达的影响

3．3 模型组3个疗程CNTF蛋白及其mRNA表达情况

3．4 电针组3个疗程CNTF蛋白及其mRNA表达情况

4 讨论

4．1 祖国医学对本病的认识

4．2 现代医学对本病的认识

4．3 本病的针灸治疗

4．4 针灸治疗本病的作用机理探讨

4．5 关于本实验研究方案的确定

4．6 关于本实验研究结果的讨论

结论

问题与展望

参考文献

致谢

附录一

附图

1 实验兔大体情况观察和造模过程

2 电针治疗过程

3 各组HE染色光镜图片

4 各组电镜图片

5 各组CNTF免疫组化图片

6 各组CNTFmRNA原位杂交图片

7 面瘫模型自愈性研究的HE染色光镜图片

8 面瘫模型自愈性研究的电镜图片

附录二 综述 CNTF及其信号转导通路的实验研究现状

公开发表的学术论文、专著及科研成果

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