二氢青蒿素抑制Fe2+依赖的卵巢癌细胞生长及其联合CDDP抗肿瘤作用的实验研究

摘要

目的：探讨二氢青蒿素（DHA）对Fe2+依赖性人卵巢癌A2780细胞的顺铂敏感株及耐药株的生长抑制作用及其联合 CDDP抗肿瘤作用以及相关机制。
　　研究方法：1、MTT法分别测定A2780敏感株（A2780）和进行CDDP耐药处理的A2780耐药株（A2780CIS）对CDDP、DHA单药及联合使用时的生长抑制作用。2、分别用去铁胺处理A2780和A2780CIS，并用MTT法测定DHA对二者的生长抑制作用。3、细胞克隆法测定CDDP、DHA以及CDDP联合DHA对A2780及A2780CIS的克隆形成率。4、流式细胞仪检测CDDP、DHA以及CDDP联合DHA对A2780敏感株及耐药株的细胞凋亡率。
　　研究结果：
　　1、DHA对A2780及A2780CIS两种细胞的72h半数抑制浓度（IC50）分别为46.34±3.47μmol/L、97.00±3.82μmol/L。DHA对A2780的IC50为CDDP的5.34倍，对A2780CIS细胞的IC50为DHA的4.37倍。
　　2、CDDP联合DHAIC10浓度对A2780及A2780CIS细胞株的IC50分别为11.23±1.40μmol/L,26.85±2.02μmol/L，对A2780及A2780CIS的作用与单独使用CDDP无明显不同。
　　3、CDDP和DHA以各自IC20、IC30、IC40、IC50浓度联合对A2780和 A2780CIS作用的细胞存活率较单独CDDP时降低，呈浓度依赖性，A2780与A2780CIS无差异。
　　4、去铁胺0、25、100、200 umol/L作用6h后，DHA对A2780及A2780CIS细胞存活率上升，高浓度（100、200 umol/L）处理组上升更明显。
　　5、A2780及A2780CIS在CDDP联合DHA作用下克隆形成率比CDDP单药组降低，并且随着浓度增高，两细胞株不同药物作用组的克隆形成率均降低，此趋势DHA组最为明显，在高浓度（IC40/IC50）时几乎接近CDDP组。
　　6、A2780及A2780CIS使用CDDP联合DHA组凋亡率较CDDP单药组高，结果显示，A27806h与A278024h有差异，A2780CIS两时间组之间凋亡率也有差异，均为24h组凋亡率高于6h组。
　　研究结论：
　　1、二氢青蒿素对卵巢癌A2780及A2780CIS细胞均有杀伤作用，该作用呈浓度依赖方式，且与细胞内 Fe2+的参加有密切关系。其机制可能是因 Fe2+依赖性卵巢癌细胞内高浓度的Fe2+与DHA内部过氧化桥反应形成自由基，对卵巢癌细胞DNA造成了不可逆的损伤，使其DNA断裂而难以修复。
　　2、二氢青蒿素在低浓度（IC10：1-2umol/L）时联合CDDP对A2780及A2780CIS细胞无增敏作用，但在高浓度（IC20、IC30、IC40、IC50）时联合CDDP对A2780及A2780CIS细胞具有协同作用，该效果随浓度递增。可能原因是DHA使DNA断裂而CDDP使DNA双链交联，二者短时间、低浓度内对DNA的作用有重合且DHA作用弱于CDDP而不能显效，而时间的延长和剂量的加大则暴露了DHA作用与CDDP的互补，使其修复能力降低。
　　3、二氢青蒿素对A2780及A2780CIS细胞具有促凋亡作用，其作用效果与时间长短有关，进一步验证了DHA对CDDP具有协同增敏作用。

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目录

1 引言

2、材料与方法

2.1 材料

2.1.1细胞株

2.1.2主要试剂

2.1.3主要实验仪器

2.1.4 主要实验耗材

2.1.5主要实验试剂的配制

2.2 方法

2.2.1 细胞培养

2.2.2 制备实验药物

2.2.3 MTT法

2.2.4 克隆法

2.2.5 流式细胞仪测凋亡

2.3 统计学方法

3、结果

3.1 MTT结果

3.2克隆实验结果

3.3 流式细胞术测凋亡结果

4．讨论

4.1二氢青蒿素抗肿瘤作用与卵巢癌耐药逆转

4.2、DHA作用效果与Fe2+相关性

4.3 二氢青蒿素对卵巢癌的促凋亡作用

4.4中药青蒿与二氢青蒿素的抗肿瘤作用

5．问题与展望

6．结论

参考文献

综述: 青蒿素以Fe2+介导为主的抗肿瘤效应研究进展

致谢

声明

附录二 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果