中药注射剂的生物毒性评价及质量控制研究

摘要

本研究通过对新的in vitro和ex vivo生物活性评价方法，尤其是Microtox生物毒性测试技术及其应用进行探索研究，建立了以费氏弧菌为测试菌种的发光细菌生物毒性（综合毒性）评价方法，并将此法应用于中药注射剂综合毒性检测的新方法，用于辅助其质量控制，为生物活性测定法应用于中药注射剂质量控制起示范作用；同时通过对中药注射剂（红花注射液）抗原性杂质与质量控制进行研究，探索其与中药注射液不良反应发生的关系，为提高中药注射剂的质量标准提供了依据。
　　1、发光细菌生物毒性评价体系的建立及其在鱼腥草注射液、红花注射液毒性评价应用
　　本研究建立了以费氏弧菌为测试菌种的发光细菌生物综合毒性评价方法。体系最优检测时间为15min，15min最优发光强度为500～1000，最优pH值为5.0～9.0，且实验证明在此体系下，重复性和中间精密度均良好，相对偏差均<15％。采用本文所建立的发光细菌生物综合毒性评价方法，对10批甲厂鱼腥草注射液成品，3批甲厂鱼腥草注射液半成品、2批甲厂用鱼腥草注射液溶媒、10批乙厂鱼腥草注射液成品以及10批红花注射液阳性样品（即临床发生不良反应的红花注射液样品）和10批红花注射液阴性样品（即临床无不良反应的红花注射液样品）进行生物综合毒性检测，发现各厂家、各批次的鱼腥草注射液样品之间的综合毒性差异较大，红花注射液阳性样品 EC50值明显低于红花注射液阴性样品，且具有显著性差异。
　　2、红花注射液抗原活性杂质与质量控制研究
　　本研究首先通过对10批临床出现不良反应红花注射液样品（即阳性样品）和10批临床无不良反应红花注射液样品（即阴性样品）蛋白含量测定，发现阳性样品蛋白含量明显高于阴性样品。在此基础上模拟红花注射液制备“水提醇沉”工艺，从红花中制备出高度不均一的红花残留蛋白混合物，为红花抗原。采用超滤等方法从红花注射液中分离出大分子抗原活性杂质和小分子抗原活性杂质。利用豚鼠主动过敏反应（ASA）模型和大鼠被动皮肤过敏反应（PCA）模型证明，提取到的抗原活性杂质可以引发被红花注射液或红花抗原致敏的动物的速发型过敏反应。说明红花抗原活性杂质（红花残留蛋白混合物）可能是导致临床过敏反应的原因之一，建议现有检查标准对于蛋白检测项从定性检测改为定量检测。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

目录

中英文对照

前言

实验部分

第一部分 发光细菌生物毒性评价体系的建立与验证

1.1 材 料

1.2 方 法

1.3 统计学处理

1.4 结 果

1.5 小 结

第二部分 鱼腥草注射液对发光细菌的生物毒性研究

2.1 材 料

2.2 方 法

2.3 统计学处理

2.4 结 果

2.5 小 结

第三部分 红花注射液对发光细菌的生物毒性研究

3.1 材 料

3.2 方 法

3.3 统计学处理

3.4 结 果

3.5 小 结

第四部分 中药注射剂抗原活性杂质与质量控制研究

4.1 材 料

4.2 方 法

4.3 统计学处理

4.4 结 果

4.5 小 结

第五部分 结论与讨论

5.1 Microtox 技术毒性评价体系

5.2 中药注射剂对发光细菌的综合毒性

5.3中药注射剂抗原活性杂质与质量控制研究

参考文献

综述:发光细菌毒性检测法的研究进展

致谢

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

声明