新加葛根芩连汤对糖尿病认知障碍大鼠海马微血管损伤及PI3K/AKT/CREB信号通路的作用机制研究

摘要

目的：
　　1.观察新加葛根芩连汤防治糖尿病认知功能障碍的效果。
　　2.分析糖尿病认知功能障碍大鼠海马神经血管单元中脑微血管紧密连接蛋白、内皮祖细胞、海马神经元形态学及PI3K/AKT/CREB信号通路的变化，探索新加葛根芩连汤保护神经血管单元的机制。
　　3.明确新加葛根芩连汤防治糖尿病认知功能障碍的作用点。
　　方法：
　　选SD大鼠120只，适应性饲养后分为空白组（15只）和高脂组（105只）。空白组给予普通饲料喂养，高脂组给予高脂饲料喂养4周；继之高脂组给予1％STZ腹腔注射复制糖尿病模型，空白组给予等量的0.1M的枸橼酸钠，3天后测随机血糖＞16.7mmol/L视为糖尿病造模成功。将成功造模的大鼠随机分为模型组，新加葛根芩连汤大、中、小剂量组，西药对照组。空白组和模型组给予纯净水灌胃，治疗组分别给予不同剂量的新加葛根芩连汤、西洛他唑灌胃。连续8周后Morris水迷宫测大鼠学习记忆能力。测体重、血糖、血清胰岛素水平，流式细胞仪检测外周血中内皮祖细胞的数量。HE、电镜观测海马神经元、微血管形态学改变及伊文蓝注射后血脑屏障破坏情况，通过荧光分光光度定量的方法测脑组织伊文蓝含量。RT-PCR检测PI3K、AKT、CREB、HIF-1α、VEGF，免疫组化检测CD34、IGF-1、CREB，Westen-blot检测occludin、claudins、JAM-1、Z0-1四种紧密连接蛋白。
　　结果：
　　1.糖尿病8周时Morris水迷宫检测学习记忆能力明显下降，说明糖尿病认知功能障碍模型复制成功。
　　2.糖尿病大鼠伊文蓝注射后观测血管外渗明显，光镜下可见血管周围蓝染，伊文蓝含量明显高于空白组（P<0.05）。电镜下血管外间隙水肿明显，血管变形，官腔狭窄。免疫组化CD34染色阳性细胞较空白组较少。说明糖尿病大鼠微血管损害，血脑屏障破坏，微血管数目减少，微血管修复新生功能低下。
　　3.光镜下可见模型组海马CA1区神经元数目减少、排列不规则、可见坏死细胞及胶质细胞。说明糖尿病大鼠出现海马神经元损伤。免疫组化显示IGF-1、CREB表达减少。
　　4.新加葛根芩连汤干预后各治疗组海马光电镜观测细胞、血管形态均较模型组明显改善，伊文蓝含量较模型组明显减低，occludin、claudins、Z0-1表达明显增加。EPCs数量较模型组明显增多，CD34阳性细胞增多,PI3KmRNA、AKTmRNA、CREBmRNA、HIF-1α mRNA、VEGFmRNA表达增强。
　　结论：
　　1.新加葛根芩连汤可明显改善糖尿病认知功能障碍大鼠学习记忆能力。
　　2.新加葛根芩连汤能保护糖尿病海马大鼠血脑屏障，与增强血管紧密连接蛋白occludin、claudins、Z0-1表达有关。
　　3.新加葛根芩连汤能促进糖尿病大鼠海马血管新生,改善海马缺血缺氧状态，减轻海马神经元损伤。
　　4.新加葛根芩连汤保护糖尿病认知功能障碍大鼠海马神经元，通过调节海马神经元IGF-1及PI3K/AKT/CREB信号通路活性起作用。

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引言

第一部分 新加葛根芩连汤对糖尿病认知功能障碍大鼠认知功能的影响

1实验材料

2 实验方法

3统计学处理

4 实验结果

5讨论

6 小结

第二部分 新加葛根芩连汤对糖尿病认知功能障碍大鼠血脑屏障损伤的修复作用

1.实验材料

2.实验方法

3统计方法

4 结果

5 讨论

6 小结

第三部分 新加葛根芩连汤对糖尿病认知功能障碍大鼠微血管修复及新生的影响

1实验材料

2.实验方法

3 统计分析

4 结果

5讨论

6小结

第四部分 新加葛根芩连汤对糖尿病认知功能障碍大鼠PI3K/AKT/CREB信号通路的影响

1 实验材料

2实验方法

3 统计分析

4 结果

5讨论

6小结

结论

主要创新

问题与展望

一、问题

二、展望

附图

致谢

参考文献

综述一:糖尿病认知功能障碍的中西医治疗研究进展

综述二:糖尿病认知功能障碍的微血管病变研究进展

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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