基于肺痨康联合异烟肼对耐药性结核小鼠肺、脾组织的影响探讨肺痨康的增效作用

摘要

目的：通过肺痨康联合异烟肼对耐药性结核小鼠肺、脾组织的影响，探讨肺痨康治疗耐药性结核的增效作用。
　　方法：基于前期实验研究，采用尾静脉注射耐异烟肼结核分枝杆菌悬液建立耐异烟肼结核小鼠模型，注射H37RV标准结核分枝杆菌悬液建立标准结核小鼠模型。本实验共120只SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为6组，耐异烟肼结核小鼠模型4组，分别予以0.9％氯化钠注射液（模型组）、1%的异烟肼水溶液（异烟肼组）、1g/ml肺痨康水煎液（肺痨康组）、肺痨康联合异烟肼药液（联合组）进行干预；标准结核小鼠模型（标准菌株组）1组予0.9%氯化钠注射液灌胃；空白组为未种菌的SPF级健康小鼠。每周称重一次，连续灌胃56天后处死小鼠，取出小鼠肺和肝、脾组织行病理检查；取出小鼠部分肺组织，做细菌培养，将培养出来的结核菌进行菌落计数，将结核菌灭活进行DNA的分离提纯，用全基因重测序的方法，对结核杆菌基因组DNA进行重测序，以标准菌株（H37RV）为参考序列，筛选出与ahpC基因相关的突变位点,进行对比分析。
　　结果：①联合组小鼠，精神状态较好，表现为反应较灵敏，动作较灵活，被毛较光泽；营养状况良好，表现为皮肤有弹性、色粉红，肌肉丰硕，体格较状，其体重增加明显大于肺痨康组、异烟肼组、模型组、标准菌株组和空白组（P＜0.05）；肺痨康组的小鼠，精神状态较差逐渐出现反应稍迟钝，动作稍迟缓，被毛无光泽，营养状况欠佳，表现为皮肤发紫、弹性较差、皮温正常，形体偏瘦，但无肋骨外露，体重增加明显大于模型组、标准菌株组及空白组（P＜0.05）；异烟肼组的小鼠，精神状态较差表现为反应稍迟钝，动作稍迟缓，被毛无光泽，营养状况欠佳表现为皮肤发紫、弹性较差、皮温正常，形体偏瘦，但无肋骨外露，其体重增加幅度与肺痨康组的体重增加幅度无明显差异（P＞0.05）；空白组的小鼠精神状态好表现为反应灵敏，动作灵活，被毛光泽，营养中等表现为体格健壮，皮肤有弹性，肌肉丰硕，其体重增加幅度明显大于模型组和标准菌株组（P＜0.05）。②肺痨康组与模型组相比，肺组织和脾组织损伤程度明显较轻（P＜0.05），肝组织损伤也有所减轻，但差异不明显，无统计学意义（P＞0.05）。异烟肼组与模型组相比，肺组织和脾组织损伤程度明显较轻（P＜0.05），肝组织损伤也有所减轻，差异不明显，无统计学意义（P＞0.05）。联合组与模型组相比，肺组织和肝组织损伤程度明显较轻（P＜0.05），脾组织损伤程度较模型组轻，差异不明显，无统计学意义（P＞0.05）。肺痨康组与异烟肼组相比，肺组织和肝组织损伤程度较轻（P＜0.05），脾组织损伤程度无明显差异（P＞0.05）。肺痨康组与联合组相比，肺组织、肝组织和脾组织损伤程度均无明显差异（P＞0.05）。异烟肼组和联合组相比，肺组织损伤程度较重（P＜0.05），肝组织损伤程度无明显差别（P＞0.05），脾组织损伤程度较轻（P＜0.05）。③肺痨康组与模型组相比，小鼠肺组织研磨液稀释10倍和100倍培养出来的结核分枝杆菌数均明显较少（P＜0.05）。异烟肼组与模型组相比，小鼠肺组织研磨液稀释10倍和100倍培养出来的结核分枝杆菌数均明显较少（P＜0.05）。联合组和模型组相比，小鼠肺组织研磨液稀释10倍和100倍培养出来的结核分枝杆菌数均明显较少（P＜0.05）。肺痨康组和异烟肼组相比，小鼠肺组织研磨液稀释10倍和100倍培养出来的结核分枝杆菌数，差异均无统计学意义（P＞0.05）。肺痨康组和联合组相比，小鼠肺组织研磨液稀释10倍和100倍培养出来的结核分枝杆菌数均明显较多（P＜0.05）。异烟肼组与联合组相比，小鼠肺组织研磨液稀释10倍培养出来的菌落数较多，但差异无统计学意义（P＞0.05），稀释100倍培养出来的菌落数均明显较多（P＜0.05）。④7个碱基突变位点的ahpC基因对应的密码子和氨基酸均未发生改变。肺痨康组和肺痨康联合异烟肼组的突变位点2729621，对应的密码子Gcc→Tcc，氨基酸由丙氨酸变为丝氨酸。
　　结论：①采用小鼠尾静脉注射法建立耐异烟肼结核小鼠模型和标准结核小鼠模型成功。②肺痨康能显著提高耐异烟肼结核小鼠体重的增长幅度（P＜0.05），改善小鼠的精神状态及营养状况。③肺痨康具有促进异烟肼减轻耐异烟肼结核小鼠肺、肝、脾组织病理损伤的作用，其中减轻肺、脾组织病理损伤的作用显著(P<0.05)。④肺痨康水煎液、异烟肼水溶液及肺痨康联合异烟肼药液均具有抑制小鼠肺组织MTB生长繁殖的作用，抑制稀释10倍的肺组织研磨液培养出来的MTB作用显著（P＜0.05）。