抗冷冻蛋白Ⅲ对家兔卵巢组织冷冻效果的影响

摘要

目的：卵巢组织冷冻和移植在保存女性生育力，恢复生殖内分泌功能方面具有重要作用，已成为生殖医学研究的重要课题。但是卵巢组织的冷冻损伤和移植后缺血损伤是制约卵巢组织冷冻移植技术发展的瓶颈。研究发现抗冷冻蛋白在组织和细胞的冷冻保存中取得了较好效果。本研究旨在评价抗冷冻蛋白Ⅲ（AFPⅢ）在家兔卵巢组织冷冻保存中的效果。
　　方法：本研究选用家兔卵巢为研究对象，分别采用玻璃化冷冻技术冷冻家兔卵巢皮质片段，慢速冷冻和玻璃化冷冻技术冷冻家兔全卵巢，并在常规保护剂方案中添加AFPⅢ。将冻融后的卵巢行光学显微镜组织学特性分析，透射电子显微镜观察超微结构变化，TUNEL法检测卵巢组织间质细胞、颗粒细胞和卵母细胞的凋亡情况；共聚焦显微镜下检测卵泡存活情况。
　　结果：采用玻璃化冷冻法冷冻卵巢家兔皮质片段，解冻复苏后，新鲜卵巢组的卵泡形态正常率显著高于两冷冻组（P<0.05），卵母细胞凋亡率显著低于两冷冻组（P<0.05）；在冷冻保护剂中添加AFPⅢ后卵泡形态正常率显著高于未添加AFPⅢ的常规玻璃化冷冻组（P<0.05），卵母细胞凋亡率显著低于常规玻璃化冷冻组。
　　采用慢速冷冻和玻璃化冷冻家兔全卵巢，解冻复苏后，新鲜组卵泡形态正常率、间质细胞密度、卵泡存活率显著高于4组冻融组（P<0.05）；新鲜组卵母细胞凋亡率显著低于4组冻融组。慢速冷冻法冷冻家兔全卵巢时，在冷冻保护剂中添加AFPⅢ后卵泡形态正常率、间质细胞密度和卵泡存活率较未添加AFPⅢ明显升高（P<0.05）；而其卵母细胞凋亡率显著低于未添加AFPⅢ组（P<0.05）。玻璃化冷冻家兔全卵巢时，在冷冻保护剂中添加AFPⅢ后卵泡形态正常率和间质细胞密度较未添加AFPⅢ明显升高（P<0.05）；卵母细胞凋亡率显著低于未添加AFPⅢ组（P<0.05）；而两组间卵泡存活率无明显差异（P＞0.05）。采用玻璃化冷冻法冷冻家兔全卵巢的卵泡形态正常率、卵泡存活率和卵母细胞凋亡率，与慢速冷冻法相比无显著差异（P＞0.05），但其间质细胞密度显著高于慢速冷冻（P<0.05）。
　　结论：采用玻璃化冷冻技术冷冻家兔卵巢组织片段，新鲜卵巢组的卵泡形态正常率显著高于冻融后卵巢组织，而卵母细胞凋亡率明显低于冻融卵巢，说明卵巢皮质玻璃化冷冻过程中存在冷冻损伤；而冷冻保护剂中加入AFPⅢ可减少家兔卵巢皮质玻璃化冷冻损伤，提高卵泡形态正常率减低卵母细胞凋亡率。
　　采用慢速冷冻和玻璃化两种方法冷冻家兔全卵巢，两种冷冻方法的效果相当，但玻璃化冷冻对全卵巢的间质细胞冷冻保存效果优于慢速冷冻。在慢速冷冻和玻璃化冷冻保护剂中添加AFPⅢ均能提高卵泡形态正常率，增加间质细胞密度；减少卵巢组织内颗粒细胞、间质细胞凋亡，减低卵母细胞凋亡率；提高卵泡存活率，并对卵泡超微结构有较好的保护作用，这种保护作用在慢速冷冻中更加明显。

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引言

1. 保存女性生育力具有重要意义

2. 卵巢组织冷冻移植在女性生育力保存中具有重要作用

3. 冷冻损伤是制约卵巢组织冷冻技术发展的瓶颈

4. 抗冷冻蛋白在冷冻保存组织细胞中取得较好效果

第一部分抗冷冻蛋白Ⅲ对家兔卵巢皮质片段玻璃化冷冻复苏的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第二部分冷冻保护剂中添加抗冷冻蛋白Ⅲ对家兔全卵巢冷冻保存的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

结论与展望

致谢

参考文献

综述： 卵巢冷冻及移植研究进展

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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