大黄和酒大黄活血祛瘀药理作用部位的HPLC指纹图谱研究

摘要

大黄通过酒炙，增强活血祛瘀作用，在千百年临床实践中，酒大黄多用于活血处方中。本论文在中医药理论的指导下，采用现代科学技术在活血祛瘀部位、药理实验和指纹图谱三方面，对大黄及炮制品酒大黄进行研究。以大黄酒炙增强活血祛瘀作用为切入点，通过“中药炮制-药性理论-化学成分-药理作用-指纹图谱”的综合研究模式。研究酒大黄具有活血祛瘀药理作用的有效部位，并对该作用部位进行指纹图谱的研究。这对阐明和证实中药炮制理论，确保中药饮片疗效，指导饮片厂正确加工炮制大黄，具有非常重要的现实意义。为酒大黄饮片质量控制体系的建立提供部分科学依据。 按《中国药典》2005年版一部相关要求对大黄和酒大黄同一批药材三组样品进行平行测定。结果表明，实验药材符合药典的要求，为合格药材。采用试管法和滤纸法，对大黄和酒大黄的蒸馏水、95％乙醇、石油醚提取物进行研究，通过与多种指示剂和显色剂的沉淀反应或颜色反应，结果表明大黄和酒大黄中含有氨基酸、蛋白质、多肽、糖类、皂甙、酚类、鞣质、有机酸、黄酮类、香豆素、葸醌、萜类、甾体、挥发油、油脂等化学成分。未发现生物碱、强心甙等成分。 采用系统溶剂法分离、提取大黄和酒大黄不同极性的提取部位。依次用氯仿、正丁醇、50％乙醇和水作为提取溶剂进行提取。提取条件：加10倍量溶剂，提取两次，每次提取1小时，对提取液进行过滤、浓缩，最后得到相应溶剂的提取部位。 通过动物药理实验，应用活血祛瘀相关的药效学指标，证明大黄经酒制后，增强了活血祛瘀功效，并筛选酒大黄的活血祛瘀药理作用的部位为50％乙醇提取物。 确定了酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱条件。色谱仪：LC-20AB高效液相色谱仪；色谱柱：Krosmosil C18(4.6mm×200mm，5μm)；流动相：A(0.1％磷酸甲醇)：B(0.1％磷酸水)为(82:18)；流速：1.0ml/min：流程：35min；检测波长：254nm；柱温：室温。 首次初步建立酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱。确定7个峰作为特征峰组成其指纹图谱。通过考察六个不同企业的酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱，建立了标准HPLC指纹图谱。通过与对照品比较，确定了酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱中三个色谱峰的归属，分别是：大黄酸、大黄素和大黄酚。 经中药色谱指纹图谱相似度评价软件计算，10批同一生产企业生产的不同批次酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱相似度均在0.98以上。考察五个不同生产厂家的酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱，整体轮廓均符合共有特征，均可视为酒大黄药材。其相似度均在0.91以上。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章引言

1.1研究意义

1.2研究现状

1.2.1大黄和酒大黄活血祛瘀药理作用的研究现状

1.2.2大黄HPLC指纹图谱研究现状

1.2.3大黄、酒大黄研究现状

1.2.4中药指纹图谱

1.3研究目标

1.4研究内容

1.5研究路线及特色

1.6主要成果

第2章大黄和酒大黄化学成分预实验

2.1实验材料

2.1.1仪器

2.1.2试剂

2.1.3样品

2.2实验部分

2.2.1药材的鉴定

2.2.2供试液的制备

2.2.3供试液的定性鉴别

2.2.4实验方法

2.3实验结果

2.3.1药材的鉴定

2.3.2供试液的定性鉴别

2.4结果与讨论

2.5小结

第3章应用活血祛瘀相关的药效学指标筛选酒大黄活血祛瘀药理作用的部位

3.1实验材料：

3.1.1供试药品

3.1.2实验动物

3.2实验仪器

3.3实验方法

3.4结果与讨论

3.5小结

第4章酒大黄活血祛瘀药理作用部位的HPLC指纹图谱研究

4.1实验材料

4.1.1仪器

4.1.2试剂

4.1.3标准对照品

4.1.4样品

4.2实验部分

4.2.1对照品溶液的制备

4.2.2供试品溶液的制备

4.2.3色谱条件

4.2.4色谱条件的优化

4.2.5色谱指纹图谱实验的方法学验证

4.2.6样品测定

4.3结果

4.3.1酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱的建立

4.3.2 10酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱的分析、比较和辨认

4.3.3 10酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱相似度评价

4.3.4酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC标准指纹图谱的建立

4.3.5不同生产企业酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱的分析、比较和辨认

4.3.6不同生产企业酒大黄活血祛瘀药理作用部位HPLC指纹图谱相似度评价

4.4讨论

4.5小结

结论

致谢

参考文献