蛋白质组学技术筛查人小腹主动脉瘤血清差异蛋白研究

摘要

目的：
　　利用双向凝胶电泳-基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(2-DE-MALDI-TOF-MS)等差异蛋白质组学技术分析外周动脉硬化、小腹主动脉瘤、大腹主动脉瘤患者和健康人的血清,筛选并鉴定血清差异蛋白分子,同时探讨其与疾病的关系,为研究小腹主动脉的标志物提供生物学线索和方向。
　　方法：
　　收集我院门诊和病房的下肢动脉硬化、小腹主动脉瘤和大腹主动脉瘤患者入院次日空腹的外周静脉血清,以及志愿健康人的血清,Aurum试剂盒去除血清高丰度蛋白预处理后,利用双向凝胶电泳技术分离血清蛋白,Imagemaster5.0图像软件分析四组血清蛋白的蛋白相对表达量％Vol值,并对各组间进行比较。凝胶上挖取差异蛋白点经MALDI-TOF-MS质谱技术分析获取肽质量指纹图谱(PMF),利用Mascot软件在NCBInr数据库内检索以鉴定蛋白质。
　　结果：
　　四组间除血胆固醇水平外其余血管疾病危险因素无统计学差异。四组凝胶均获得清晰的血清2-DE蛋白表达图谱。平均每张凝胶的双向电泳图谱可识别蛋白点数为1089±121个。筛选出有统计学意义的5个差异蛋白点,质谱成功鉴定出9种蛋白质,分别为:神经胶质纤维酸性蛋白异构体1、转铁蛋白、转化酸性卷曲螺旋含蛋白质1、触珠蛋白前体、触珠蛋白相关蛋白、α-1-微球蛋白、皮离蛋白前蛋白原、神经胶质γ成熟因子和前白蛋白。组间分析显示,神经胶质纤维酸性蛋白异构体1在正常对照组血清差异蛋白点-1的(%Vol)%值(1.94±0.72)显著高于PAD组(1.29±0.37)和large-AAA组(1.06±0.38)(P<0.05),提示其表达从正常对照组至PAD组、small-AAA组和large-AAA组呈下调趋势。large-AAA组血清的转化酸性卷曲螺旋含蛋白质1的(%Vol)%值(4.34±2.64)显著高于正常对照组(1.43±1.80)、PAD组(0.89±1.13)和small-AAA组(1.62±1.61)(P<0.05),提示其表达从正常对照组、PAD组、small-AAA组至large-AAA组呈逐渐上调趋势。Small-AAA组血清的触珠蛋白前体与触珠蛋白相关蛋白的(%Vol)%值(4.39±1.24)显著高于正常对照组(2.32±0.60)、PAD组(2.78±0.97)和large-AAA组(3.06±1.22)(P<0.05),提示其相对含量从正常对照组、PAD组至AAA组(含small-和large-AAA组)呈上调趋势。Small-AAA组血清的神经胶质γ成熟因子的(%Vol)%值(2.95±0.32)显著高于正常对照组(1.88±0.23)和PAD组(2.02±0.30)(P<0.05),large-AAA组血清的神经胶质γ成熟因子的(%Vol)%值(2.65±1.09)也显著高于正常对照组(1.88±0.23)(P<0.05),提示神经胶质γ成熟因子的相对含量从正常对照组、PAD组至AAA组(含small-和large-AAA组)亦呈上调趋势。
　　结论：
　　成功构建小腹主动脉瘤和大腹主动脉瘤的血清2-DE蛋白表达谱,共筛检出5个差异蛋白点,其中1个表达下调,4个表达上调。MALDI-TOF质谱分析成功鉴定出9种蛋白质,其中触珠蛋白、触珠蛋白相关蛋白和神经胶质γ成熟因子在小腹主动脉瘤血清表达含量上调,大腹主动脉瘤的转化酸性卷曲螺旋含蛋白质1血清表达上调,上述差异蛋白可能成为腹主动脉瘤和动脉粥样硬化的候选标志物,也可能是潜在药物治疗靶点。

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III前言

IV正文蛋白质组学技术筛查人小腹主动脉瘤血清差异蛋白研究

4.1材料与方法

4.1.1 研究对象和病例分组

4.1.2 血清样本采集与保存

4.1.3 主要试剂与仪器

4.1.4 实验方法与步骤

4.2结果

4.2.1 临床基线资料结果

4.2.2 血清2-DE蛋白表达图谱的建立

4.2.3 M 2-DE图谱筛选差异蛋白点结果

4.2.4 差异蛋白点的质谱分析及鉴定

4.3讨论

4.4结论

参考文献

V 总结

VI文献综述

VII 附录:英文缩略语词表

VIII 攻读学位期间发表文章情况

IX致谢