合并创伤性脑损伤的四肢骨折小鼠血清对破骨细胞分化影响的研究

摘要

研究背景：
　　骨折愈合参与的细胞主要包括成骨细胞和破骨细胞,通过成骨作用和破骨作用,使新生骨结构能满足机体的生物力学要求[1,2]。任何因素影响成骨细胞或(和)破骨细胞,都将影响骨折的愈合。
　　临床中发现合并TBI的四肢骨折患者其骨折断端的骨痂量增多且骨折愈合加速[3-6],对其机制尚无定论,研究多集中在血清学改变对成骨细胞的影响,而对破骨细胞研究很少。Sema3A是神经修复过程中的一种信号蛋白,最新研究发现Sema3A具有促进成骨作用[7]。因此我们提出问题:对于TBI合并骨折愈合过程中Sema3A有何变化,且Sema3A对破骨细胞有何影响。通过检测TBI合并骨折小鼠的血清中Sema3A的变化,并观察在体外对破骨细胞的影响,以探索合并TBI的骨折血清中Sema3A的水平变化可能为骨折愈合加速的原因之一。
　　目的：
　　建立TBI合并股骨骨折的小鼠模型,检测模型小鼠血清中Sema3A水平的变化,并观察模型小鼠血清对破骨前体细胞分化及功能影响。
　　方法：
　　①应用自由落体撞击装置建立小鼠创伤性脑损伤,同时利用横行截骨术建立骨折模型,观察小鼠损伤后生命体征和病理学改变,并且通过简明脑损伤严重程度评分(neurologicalseverityscore,NSS)量表,评价小鼠脑损伤的严重程度。
　　②将小鼠分为三组:TBI合并股骨骨折组(TBI+F)、单纯股骨骨折组(F)、单纯TBI组(TBI)。于伤后1d、3d、5d、1w和2w分别取静脉血,获得血清。
　　③利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠伤后各时间点的血清Sema3A及OPG的含量改变。
　　④将伤后3d收集的血清以体积分数10％加入RAW264.7培养体系中,培养9d天后,计数抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性细胞数目,同时计数骨磨片吸收陷窝数目。
　　结果：
　　①TBI后,小鼠出现明显的生命体征改变,逐渐恢复正常,脑组织肉眼观察到脑皮质挫伤出血、蛛网膜下腔出血等,简明NSS评分表明TBI后小鼠脑中重度损伤。
　　②TBI+F组、TBI组伤后血清中Sema3A水平较F组小鼠血清在各个时间点均升高。各组在伤后1d、3d、5d及2w时,Sema3A浓度具有明显差异;而伤后7d时,各组之间无明显统计学差异。小鼠血清中OPG水平无明显差异。
　　③各组TRAP染色阳性多核细胞计数及骨磨片吸收陷窝计数有统计学差异,TBI+F组TRAP染色细胞计数较加入其他组减少,较F组具有统计学差异,而较TBI组无统计学差异。
　　结论：
　　①本小鼠TBI合并骨折模型建立成功,可用于实验观察血清学改变。
　　②TBI合并股骨骨折小鼠血清中Sema3A水平升高,合并TBI的股骨骨折小鼠血清能抑制破骨前体细胞分化、成熟,据此推测骨折合并TBI后其愈合过程中骨痂量增多、愈合速度加快,可能与高水平Sema3A抑制破骨细胞分化增殖有关。

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正文

实验一 创伤性脑损伤合并股骨骨折小鼠模型建立

1 实验目的

2 实验材料

3 实验方法

4 结果

讨 论

实验二 创伤性脑损伤合并股骨骨折小鼠血清Sema3A与OPG含量的检测及其对破骨细胞分化及功能的影响

1 实验目的

2 实验材料

3 实验方法

4 结果

讨 论

全文总结

参考文献

综 述

硕士在读期间发表文章

致 谢