HIF-1α与Th17/Treg失衡对烟雾暴露哮喘大鼠气道炎症的影响及西罗莫司治疗作用的研究

摘要

目的:近年研究证明吸烟的支气管哮喘(简称哮喘)患者较非吸烟哮喘患者急性发作次数更多、肺功能减退更快、激素治疗反应较差、甚至可能突然死亡。本研究拟通过建立烟雾暴露哮喘大鼠模型,探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与Th17/Treg细胞失衡对烟雾暴露哮喘大鼠气道炎症的影响,观察西罗莫司对烟雾暴露哮喘的治疗效果及其作用机制,以降低哮喘发病率和死亡率。
　　方法:
　　1.建立烟雾暴露哮喘大鼠模型及分组:
　　①正常对照组;
　　②吸烟组;
　　③哮喘组;
　　④烟雾暴露哮喘组。
　　各组模型建立后处死大鼠取肺组织行病理HE染色,分析气道周围炎症反应积分,对中性粒细胞和嗜酸粒细胞炎症程度进行评分。
　　2.HIF-1α与Th17/Treg失衡对烟雾暴露哮喘大鼠气道炎症的影响及相关性研究:
　　⑴分别采用RT-PCR及Western-blot免疫印迹方法检测以上4组肺组织HIF-1α、RORγt及FoxP3的mRNA和蛋白表达;
　　⑵采用流式细胞仪检测以上4组脾脏单个核细胞中Th17与Treg细胞的数量及Th17/Treg比值并比较各组分化差异;
　　⑶相关性和回归分析。
　　3.西罗莫司对烟雾暴露哮喘气道炎症的治疗作用及其机制的研究:
　　建立烟雾暴露哮喘大鼠模型并观察西罗莫司对气道炎症的治疗作用,分组如下:
　　①正常对照组;
　　②烟雾暴露哮喘组;
　　③烟雾暴露哮喘西罗莫司治疗组。
　　西罗莫司治疗剂量为0.45mg/kg体重,连续2周。各组大鼠处死后观察指标及方法同2。
　　结果:
　　1.建立烟雾暴露哮喘大鼠模型及气道炎症细胞积分分析:
　　烟雾暴露哮喘大鼠的肺组织病理以中性粒细胞为主的气道炎症。与吸烟组及哮喘组相比,烟雾暴露哮喘组的气道中性粒细胞炎症积分显著增高(P<0.05),且中性粒细胞炎症积分显著高于嗜酸粒细胞炎症积分(P<0.05)。
　　2.HIF-1α与Th17/Treg失衡对烟雾暴露哮喘大鼠气道炎症的影响及相关性研究:
　　⑴烟雾暴露哮喘组肺组织HIF-1α、RORγt的mRNA和蛋白及RORγt/FoxP3比值均增加而FoxP3mRNA和蛋白均下降(p<0.05)。
　　⑵烟雾暴露哮喘组脾脏Th17及Th17/Treg比值升高而Treg细胞下降(p<0.05)。
　　⑶相关性分析:
　　①肺组织RORγt/FoxP3比值与中性粒细胞炎性积分存在正相关(r=0.69,P<0.05);
　　②肺组织HIF-1α蛋白与RORγt/FoxP3比值存在正相关(r=0.60,P<0.05)。
　　3.西罗莫司治疗后,肺组织中性粒细胞炎症减轻,肺组织HIF-1α蛋白与RORγt/FoxP3比值下降,脾脏Th17及Th17/Treg比值显著下降(p<0.05)。
　　结论:
　　1.成功建立烟雾暴露哮喘大鼠模型,提示烟雾暴露哮喘气道炎症以中性粒细胞浸润为主。
　　2.烟雾暴露哮喘大鼠HIF-1α表达上调可能通过增加Th17数量及减少Treg数量,导致Th17/Treg失衡,其可能是烟雾暴露哮喘气道中性粒细胞炎症发病机制的重要原因。
　　3.西罗莫司不仅明显抑制嗜酸粒细胞炎症,而且对中性粒细胞炎症具有明显的抑制作用,其机制可能是通过下调HIF-1α表达纠正了烟雾暴露哮喘的Th17/Treg细胞失衡。
　　本研究对揭示烟雾暴露哮喘的发病机制及治疗具有重要意义。

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前 言

参考文献

第一部分 建立烟雾暴露哮喘大鼠模型

一、材料和方法

二、结果

三、 讨论

参考文献

第二部分 HIF1α及Th17/Treg失衡对烟雾暴露哮喘大鼠 气道炎症的影响及相关性研究

一、材料和方法

二、 实验结果

三、讨论

参考文献

第三部分 西罗莫司对烟雾暴露哮喘大鼠的治疗作用及其机制研究

一、材料和方法

二、实验结果

三、 讨论

参考文献

全文结论

综述 HIF-1α与Th17/Treg失衡在哮喘气道炎症中的作用机制研究进展

硕士期间发表论文

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