野木瓜粗提物及野木瓜注射液对小鼠脊髓神经细胞的作用

摘要

野木瓜(Stauntonia chinensis DC)在临床上用于治疗各种神经性头痛，效果显著。为了探讨野木瓜治疗神经痛的有效成分，研究了野木瓜中的苷类提取物和野木瓜注射液(IS，市售)对脊髓神经细胞的作用。
　　 实验通过震荡提取法、硅胶柱层析法对野木瓜中的苷类物质进行提取、分离；紫外光谱法对提取物进行表征；小鼠脊髓神经细胞进行原代培养、建立脊髓神经细胞缺血缺氧模型(MHI)；采用形态学观察法、MTT法、荧光法、SOD法、观察与测量神经细胞的生长状态，分析野木瓜苷类物质提取物和IS对神经细胞的保护作用。
　　 从野木瓜中获得AI粗提物，其中三萜类皂苷的含量是52.4％，黄酮苷的含量是17.9％;硅胶柱层析法进一步分离得到AI2、AI3、AI4这三类苷类物质。它们分别溶于脊髓神经细胞培养液。MTT法测定细胞活性，正常对照组、MHI对照组、MHI+AI450mg/L组和MHI+AI4200mg/L组的OD值分别是0.4567±0.0443、0.2071±0.0389、0.3 167±0.0602、0.2861±0.0373(n=6)。与MHI组相比，MHI+AI450mg/L组和MHI+AI4200mg/L组对MHI缺血缺氧脊髓神经细胞有保护作用(P＜0.05)，而AI2、AI3无此效果(P＞0.05)。IS溶于培养液后加入缺血缺氧培养的脊髓神经细胞中。实验分组为正常对照组、MHI对照组、MHI+IS 100mg/L组、MHI+IS 200mg/L组。用MTT测定细胞活性得到各实验组的OD值分别是0.4342±0.0073、0.1576±0.0228、0.4321±0.0212、0.3081±0.0171、0.2770±0.0196(n=7)。用试剂盒测得SOD值分别为13.54±1.38、7.57±0.75、10.42±0.43、12.61±1.15、9.94±2.10；用显微计数得到细胞数分别为32.00±2.45、18.50±1.65、29.50±2.20、25.50±1.51。与MHI组相比，MHI+IS 100mg/L组和MHI+IS 200mg/L组对缺血缺氧脊髓神经细胞有保护作用(P＜0.05)，特别是浓度为100mg/l时效果最好(P＜0.01)。IS溶于培养液后，加入正常条件培养的细胞中。实验分组为正常对照组、IS50mg/L组、IS 100mg/L组、IS 300mg/L组。用MTT测定细胞活性得到各实验组的OD值分别是0.4038±0.0162、0.5021±0.0182、0.5621±0.0301、0.3910±0.0141(n=5)；用试剂盒测得SOD值分别为12.21±1.38、13.23±1.15、15.14±2.10、12.12±0.90；用显微计数得到细胞数分别为27.50±3.52、29.50±3.02、35.25±3.15、28.50±2.23。与正常对照组比，IS 50mg/L组和IS 100mg/L组对脊髓神经细胞生长有促进作用(P＜0.05)，100mg/L组效果最好(P＜0.01)。
　　 综上所述，野木瓜的提取物大部分是三萜类皂苷和黄酮苷；野木瓜提取物AI4对MHI神经细胞有保护作用；一定浓度的IS对MHI脊髓神经细胞有保护作用，对脊髓神经细胞生长有促进作用。

目录

文摘

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声明

第一章绪论

§1.1野木瓜的研究

§1.2神经细胞概况

§1.3本论文的研究意义及主要研究内容

第二章野木瓜生物活性的研究

§2.1野木瓜中苷类粗品的提取及含量测定

2.1.1材料与方法

2.1.2试剂与材料

2.1.2超声波提取法提取野木瓜粗提物AI

2.1.3野木瓜粗提物AI中黄酮苷的含量测定

2.1.4 野木瓜中苷类物质的分离和纯化

2.1.5讨论

§2.2小鼠脊髓神经细胞的原代培养

2.2.1实验材料与仪器

2.2.2实验方法

2.2.3结果

2.2.4讨论

§2.3野木瓜苷类粗提物对缺血缺氧小鼠脊髓神经细胞的保护作用

2.3.1材料与仪器

2.3.2 细胞培养

2.3.3结果

2.3.4讨论

§2.4 IS对原代培养小鼠脊髓神经细胞生长的影响

2.4.1实验仪器与试剂

2.4.2实验过程

2.4.3结果

2.4.4讨论

§2.5 IS对缺血缺氧小鼠脊髓神经细胞的影响

2.5.1实验材料

2.5.2实验方法

2.5.3结果

2.5.4讨论

§2.6木犀草苷和木犀草素对缺血缺氧小鼠脊髓神经细胞的影响

2.6.1实验材料和仪器

2.6.2实验方法

2.6.3结果

2.6.4讨论

§2.7小结

致谢

参考文献

作者简介及研究成果