野木瓜注射液及野木瓜提取物对H2O2氧化损伤神经元的保护作用

摘要

目的：研究野木瓜注射液(IS)对H2O2氧化损伤大脑皮层和脊髓神经元的细胞保护作用，比较并分析两者的区别。测定IS及野木瓜提取物(AI1，AI2，AI3)的体外抗氧化能力。分析野木瓜提取物中黄酮苷及三萜皂苷类化合物的含量，并测定AI1，AI2，AI3的抗氧化能力及对氧化损伤大脑皮层和脊髓神经元的细胞保护作用。本课题为野木瓜的抗氧化保护机制提供理论依据。
　　 方法：通过MTT法测定IS对未损伤的大脑皮层和脊髓神经元细胞存活率的影响。建立H2O2氧化损伤模型，确定对神经细胞的损伤浓度。通过MTT法、胞内SOD活力和细胞外液LDH释放量的测定检测IS对。H2O2氧化损伤大脑皮层和脊髓神经元的细胞保护作用。并且运用激光共聚焦显微镜测定氧化受损及IS保护对脊髓神经元胞浆内Ca2+浓度的变化。通过脱氧核糖法测定IS体外清除·OH的能力并通过胞内SOD活力和细胞外液LDH释放量的测定检测IS对未受损大脑皮层和脊髓神经元细胞的影响。通过标准曲线法测定分析AI1，AI2和AI3中黄酮苷及三萜皂苷类化合物的含量，并且运用脱氧核糖法测定比较AI1，AI2和AI3清除·OH的能力。AI1，AI2和AI3对H2O2氧化损伤大脑皮层和脊髓神经元的细胞保护作用通过MTT法测定。
　　 结果：IS对大脑皮层神经元生长情况无显著性影响，但在100—200 mg/L时对脊髓神经元有显著地促进生长作用。100μmol/L H2O2对神经细胞作用3天后，皮层和脊髓神经元细胞存活率分别为80％和70％左右。仅IS作用于未受损皮层神经元，其细胞存活率、胞内SOD活力、细胞外液LDH释放量均无显著性变化；但IS能够增加氧化受损皮层神经元存活率，上升胞内SOD和降低细胞外液LDH的漏出。IS对未受损脊髓神经元的SOD活力无显著影响，但能够降低胞外LDH漏出；IS也能够增加氧化受损脊髓神经元存活率，提升胞内SOD并且降低细胞外液LDH的漏出，同时阻止脊髓神经元内Ca2+超载。IS及野木瓜提取物AI1，AI2和AI3都有很高的清除·OH的能力，并且呈一定的浓度依赖性。AI3的·OH清除率高于AI1和AI2．AI1，AI2和AI3中黄酮苷类物质含量为9％，11％和27％；三萜皂苷类物质含量为26．9％，41．7％和52．3％。AI1，AI2和AI3对氧化受损神经元都具有一定的保护作用，但对皮层神经元的保护作用明显优于对脊髓神经元的作用，AI3在高浓度时的大脑皮层神经元存活率为112．7％。
　　 结论：IS本身就能够促进脊髓神经元的生长，但对皮层神经元无显著影响。IS通过调节一系列抗氧化酶的活性和阻止胞浆Ca2+超载，抑制神经细胞氧化受损。另外，IS及野木瓜提取物都具有很高的·OH清除力，因此它们可直接通过捕获自由基，降低神经细胞氧化受损程度。并且随着分离纯化，AI3中苷类物质的总量达到79．3％，可推测AI3对皮层神经元具有较高的修复和促进作用与苷类物质含量有关。但由于没有完全分开黄酮苷与皂苷类物质，具体哪种物质起主要作用还需进一步研究。

目录

文摘

英文文摘

第一章 引言

1.1 野木瓜研究概况

1.1.1 野木瓜简介

1.1.2 野木瓜注射液(IS)方剂制法

1.1.3 野木瓜注射液的功效

1.1.4 野木瓜属化学成分研究

1.1.5 野木瓜药理活性

1.1.6 有效物质抗氧化活性研究

1.2 神经细胞研究概况

1.2.1 神经细胞概述

1.2.2 神经元细胞原代培养

1.2.3 神经细胞研究进展

1.3 本课题研究意义及研究内容

1.3.1 课题研究意义

1.3.2 课题研究内容

第二章 野木瓜注射液对神经元细胞生长情况的影响

2.1 实验仪器

2.2 实验试剂

2.3 实验方法与过程

2.4 实验结果

2.5 讨论与分析

第三章 野木瓜注射液对H2O2损伤神经元的细胞保护作用

3.1 实验仪器

3.2 实验试剂

3.3 实验过程与方法

3.3.1 神经元原代细胞培养

3.3.2 H2O2氧化损伤模型的建立

3.3.3 MTT测定IS对氧化损伤神经元的细胞保护作用

3.3.4 细胞形态学观察

3.3.5 总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力的测定

3.3.6 细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)活力测定

3.3.7 激光共聚焦测定脊髓神经元内Ca2+浓度

3.3.8 IS对正常神经元的细胞活性、SOD及LDH活性的影响

3.3.9 IS体外抗氧化能力的测定

3.3.10数据处理

3.4 实验结果

3.5 讨论与分析

第四章 野木瓜提取物抗氧化能力的研究

4.1 野木瓜提取物黄酮类物质含量的测定

4.1.1 实验仪器

4.1.2 实验试剂

4.1.3 野木瓜提取物中黄酮含量的测定

4.1.4 分析与讨论

4.2 野木瓜提取物皂苷类物质含量的测定

4.2.1 实验仪器

4.2.2 实验试剂

4.2.3 野木瓜提取物中皂苷含量的测定

4.2.4 分析与讨论

4.3 野木瓜提取物的抗氧化能力的测定

4.3.1 实验仪器

4.3.2 实验试剂

4.3.3 野木瓜提取物·OH清除率测定

4.3.4 实验结果

4.3.5 讨论与分析

第五章 野木瓜提取物对神经元的细胞保护作用

5.1 实验仪器

5.2 实验试剂与材料

5.3 实验方法与过程

5.4 实验结果

5.5 讨论与分析

第六章 课题小结

致谢

参考文献:

作者简介

附：论文著作

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