萌发对苦荞黄酮合成的影响及萌发物抑菌、抗肿瘤活性的研究

摘要

本课题将以苦荞种子为原料,通过对种子进行超声水浴、改变浸种条件及在萌发过程中增加紫外照射等处理,观察各处理条件对苦荞萌发效果的影响,并对苦荞萌发物中的总黄酮含量、相关酶活进行测定,分别研究不同发芽因素及合成途径中有关酶的活性与黄酮合成量之间的相关性；同时对苦荞萌发提取物的抗真菌、抗过敏、抗肿瘤等生理活性进行检测。
　　 1、在本实验室研究成果基础上,在最适宜的温度、湿度条件下,通过对苦荞种子超声水浴、采用CuSO4浸种和ZnSO4浸种以及在萌发过程中增加紫外照射等处理来萌发苦荞,萌发7天后的研究结果表明:超声水浴处理6min、采用浓度为0.01％的CuSO4和0.05％的ZnSO4浸种可以使苦荞种子的发芽率和发芽势达到最高,同时鲜重也达到最高；紫外照射对种子的发芽率没有显著影响,每天紫外照射1h对芽长的抑制作用不大明显,但可以使鲜重增加。
　　 2、萌发前对苦荞种子超声水浴处理6min,采用0.01％的CuSO4浸种和0.05％的ZnSO4浸种,都能明显刺激次级代谢产物黄酮的合成,在萌发过程中每天增加紫外照射1h也可显著提高黄酮生成量；苦荞萌发提取物中总黄酮含量随萌发时间的增长呈上升趋势。在萌发期PAL和CHI的活性变化没有相关性,PAL活性呈二次曲线变化,而CHI活性变化呈线性关系。在萌发前期,苦荞黄酮含量迅速增加的因为是PAL和CHI等共同作用的结果；随着萌发时间的增加,CHI活性的提高可能是促进黄酮含量增长的主要因为。
　　 3、针对萌发过程中总黄酮含量增加,采用了HPLC法测定萌发苦荞芽中芦丁、槲皮素含量。随着萌发时间的延长,芦丁含量逐渐增加而槲皮素不断降低,值得一提的是,在第三天,芦丁和槲皮素含量接近1:1。
　　 4、不同萌发天数的苦荞芽提取物对供试真菌的抑制效果不同,苦荞萌发物对酵母菌(yeast)和青霉(Penicillium glaucum)没有明显的抑制作用；对草莓灰霉(Botrytis cinerea)的抑制率要高于冬枣浆胞病病菌(Alternaria Nees exWallr),且抑菌性与黄酮含量存在剂量效应关系。苦荞萌发提取物对真菌孢子形成有抑制作用,可使菌体内可溶性蛋白质含量降低。
　　 5、以苦荞芽粉为原料,采用啮齿动物实验模型对其抗过敏活性进行研究。通过制备Wistar大鼠腹腔肥大细胞悬液,检测不同萌发天数的苦荞芽粉的乙醇提取物对组胺释放的影响。实验结果表明:苦荞萌发提取物对化合物(Compound48／80)引起的大鼠腹腔肥大细胞的组胺释放均有抑制作用,且抑制率高于苦荞种子的乙醇提取物。其中,以萌发3d的苦荞芽粉的抑制效果最好。芦丁和槲皮素对组胺释放均有抑制作用,且槲皮素对组胺释放的抑制作用强于芦丁。
　　 6、采用MTT方法检测,苦荞萌发提取物对A549肺癌细胞的增殖均有抑制作用,其中萌发3天的苦荞样品对肺癌细胞的抑制率最高。芦丁、槲皮素对肺癌细胞的生长均有不同程度的抑制作用,槲皮素的抑制效果效果明显优于相同浓度的芦丁。

目录

文摘

英文文摘

附录

第一章 引言

1.1 苦莽概述

1.1.1 苦荞的生物学特性及分布

1.1.2 苦荞的营养价值和保健作用

1.2 黄酮类化合物的研究进展

1.2.1 黄酮类化合物的结构与分类

1.2.2 植物合成黄酮类化合物的研究进展

1.3 苦荞黄酮的研究进展

1.3.1 苦荞黄酮的组成与分布

1.3.2 苦荞黄酮的分析测定方法

1.3.3 黄酮类化合物的生理活性

1.4 萌发对苦荞黄酮的影响

1.4.1 苦荞芽菜的营养价值

1.4.2 萌发过程中黄酮含量的变化

1.4.3 不同发芽条件对苦荞萌发的影响

1.4.4 萌发对苦荞黄酮生理活性的影响

1.5 立题背景与研究内容

1.5.1 立题背景

1.5.2 研究内容

第二章 不同发芽条件对苦荞萌发的影响

2.1 实验材料与仪器

2.1.1 实验材料与试剂

2.1.2 实验仪器

2.2 实验方法

2.2.1 苦荞的萌发工艺

2.2.2 苦荞种子发芽势和发芽率的测定

2.2.3 苦荞芽长、鲜重的测量

2.2.4 不同发芽条件对苦荞萌发的影响

2.3 结果与分析

2.3.1 超声波对苦荞芽生长的影响

2.3.2 紫外照射对苦荞芽生长的影响

2.3.3 CuSO4浸种对苦荞芽生长的影响

2.3.4 ZnSO4浸种对苦荞芽生长的影响

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 不同发芽条件对苦荞黄酮合成的影响

3.1 实验材料与仪器

3.1.1 实验材料与试剂

3.1.2 实验仪器

3.2 实验方法

3.2.1 苦荞芽粉的制备

3.2.2 苦荞芽中黄酮类化合物的提取

3.2.3 苦荞芽中总黄酮含量的测定

3.2.4 相关酶比活力的测定

3.3 结果与分析

3.3.1 不同萌发条件对苦荞黄酮含量变化的影响

3.3.2 粗酶液中蛋白质含量的测定

3.3.3 黄酮含量与相关酶活性的变化关系

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 苦荞萌发提取物抗感染效应的研究

4.1 实验材料与仪器

4.1.1 实验材料和试剂

4.1.2 实验仪器

4.1.3 试剂的配制

4.2 实验方法

4.2.1 苦荞芽粉中黄酮类活性物质的提取与含量的测定

4.2.2 苦荞萌发提取物抗真菌效果的研究

4.2.3 最低抑菌浓度(MIC)的测定

4.2.4 苦荞萌发提取物对大鼠腹腔肥大细胞组胺释放的作用

4.2.5 统计学分析

4.3 结果与分析

4.3.1 苦荞萌发期总黄酮、芦丁、槲皮素含量的变化

4.3.2 苦荞萌发提取物的抑真菌活性

4.3.3 苦荞萌发提取物对真菌孢子形成的影响

4.3.4 苦荞萌发提取物对菌体可溶性蛋白含量的影响

4.3.5 最低抑菌浓度(MIC)的测定

4.3.6 苦荞萌发提取物对大鼠腹腔肥大细胞组胺释放的影响

4.3.7 芦丁、槲皮素标准品对大鼠腹腔肥大细胞组胺释放的作用

4.4 讨论

4.5 小结

第五章 苦荞萌发提取物抗肿瘤活性的研究

5.1 实验材料和仪器

5.1.1 实验材料与试剂

5.1.2 实验仪器

5.1.3 主要溶液配制

5.1.4 内毒素的去除

5.2 实验方法

5.2.1 体外肿瘤细胞的培养

5.2.2 MTT法体外检测苦荞萌发物对A549增殖的影响

5.2.3 苦荞萌发提取物样品IC50的检测

5.2.4 芦丁、槲皮素配比溶液对A549增殖的影响

5.2.5 统计学分析

5.3 结果与分析

5.3.1 苦荞萌发提取物对A549细胞增殖抑制率的比较

5.3.2 苦荞萌发提取物IC50的检测

5.3.3 不同浓度芦丁、槲皮素单品对A549细胞增殖抑制率的比较

5.3.4 芦丁、槲皮素配比溶液对A549细胞增殖抑制率的比较

5.4 讨论

5.5 小结

第六章 总结与展望

创新与不足

参考文献

致谢及学术论文

答辩委员审查意见书