纳米粒子免疫层析法定量测定RBP和PSA技术的研究

摘要

近年来，随着生物技术与纳米技术的有机结合，使得纳米生物技术在生命科学中逐渐崭露头角并飞速发展成当前一个重要的研究领域。纳米金免疫层析技术(GICA)是20世纪90年代发展起来的一种将纳米标记技术、免疫学及色谱分析技术等有机结合而成的固相标记免疫检测技术，该技术具有快捷、灵敏、安全、成本低等特点。肾小管功能损伤和前列腺癌的早期诊断是降低肾脏疾病或前列腺癌死亡率的必要手段。因此，对它们的检测显得尤为重要。然而，传统的检测技术由于耗时长及价格昂贵等缺点已不能满足临床日益增长的对疾病早期诊断快速的要求。因此，探索GICA法以实现疾病早期诊断的快速定量检测具有重大意义。本文致力于采用纳米金免疫层析技术对视黄醇结合蛋白(RBP)和前列腺特异性抗原(PSA)进行定量检测。本论文共分为三章:
　　 第一章综述了GICA的研究进展。首先简要介绍了纳米金的发展历程、制备方法以及表征手段;接着讨论了GICA的原理、检测类型以及实际应用;最后提出了本论文的研究思路。
　　 第二章采用GICA技术制备了定量检测RBP的试纸条以实现简单、快速、灵敏地定量检测人尿液中的视黄醇结合蛋白。首先，利用柠檬酸三钠还原法制备20nm的纳米金，并用一系列技术进行表征;然后，通过实验确定了纳米金的最适pH值为9.0，RBP的最小蛋白量为24μg/mL;最后，借助免疫层析定量分析仪确定了本试纸条的检测限为150ng/mL。同时，在150-5000ng/mL的范围内具有很好的对数关系，R2=0.9981，37℃可存放2年，特异性、重复性良好。
　　 第三章采用GICA技术制备了定量检测PSA的试纸条以实现快速、简单、灵敏地定量检测人血液中的前列腺特异性抗原。通过实验确定了PSA的最小蛋白量为30μg/mL;检测限为3ng/mL，线性范围为3-20ng/mL，R2=0.9894;稳定性好，37℃可存放1年半;与PAP、CEA、NSE、AFP、FNCA50、CA242等没有交叉反应，重复性良好。

目录

摘要

第一章 文献综述

1．1 研究意义

1．2 研究进展

1．2．1 体外诊断试剂

1．2．2 纳米金免疫层析法

1．2．3 纳米金的制备

1．2．4 纳米金的性质

1．2．5 纳米金的应用

1．2．6 免疫纳米金的制备

1．2．7 纳米金免疫层析方法的发展趋势

1．3 试验方法和表征手段

1．3．1 激光Nano Zetasizer电位粒径检测仪

1．3．2 扫描电子显微镜(SEM)

1．3．3 透射电子显微镜(TEM)

1．3．4 紫外-可见分光光度计

1．3．5 BN-Q2000型纳米金免疫层析定量分析仪

1．4 本论文的研究目的和研究内容

第二章 纳米粒子免疫层析法定量测定RBP技术的研究

摘要

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 仪器和试剂

2．2．2 纳米金的制备

2．2．3 纳米金的表征

2．2．4 纳米金标记抗体条件的确定

2．2．5 免疫纳米金的制备

2．2．6 纳米金免疫层析试纸条的结构与原理

2．2．7 RBP免疫层析试纸条的制备

2．2．8 RBP免疫层析试纸条的定量测定

2．2．9 RBP试纸条稳定性实验

2．2．10 RBP试纸条重复性实验

2．2．11 RBP试纸条特异性实验

2．3 实验结果

2．3．1 纳米金的表征

2．3．2 纳米金标记抗体条件的确定

2．3．3 免疫金复合物的表征

2．3．4 RBP试纸条灵敏度实验

2．3．5 RBP试纸条检测范围的确定

2．3．6 RBP试纸条标准曲线的确定

2．3．7 RBP试纸条稳定性实验

2．3．8 RBP试纸条重复性实验

2．3．9 RBP试纸条特异性实验

2．4 讨论

2．5 结论

第三章 纳米粒子免疫层析法定量测定PSA技术的研究

摘要

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器和试剂

3．2．2 纳米金的制备

3．2．3 纳米金的紫外扫描、电镜扫描和zata电位、粒径测定

3．2．4 纳米金标记抗体条件的确定

3．2．5 免疫金复合物的标记

3．2．6 PSA免疫层析试纸条的制备

3．2．7 PSA免疫层析试纸条的定量测定

3．2．8 PSA试纸条稳定性实验

3．2．9 PSA试纸条重复性实验

3．2．10 PSA试纸条特异性实验

3．3 实验结果

3．3．1 纳米金的紫外扫描，Zata电位、粒径测定和电镜扫描

3．3．2 纳米金标记抗体条件的确定

3．3．3 免疫金复合物的表征

3．3．4 PSA试纸条灵敏度实验

3．3．5 PSA免疫层析试纸条的定量检测

3．3．6 PSA试纸条稳定性实验

3．3．7 PSA试纸条重复性实验

3．3．8 PSA试纸条特异性实验

3．4 讨论

3．5 结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间的研究成果

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