葡萄糖对黄酮-血浆蛋白相互作用的影响

摘要

天然活性物质有益于人类健康，并且在治疗一些代谢性疾病方面起着辅助性作用。在分子水平上阐明天然活性小分子的代谢、分布、与生物大分子的相互作用，明确这些成分对代谢疾病产生、发展和治疗的影响，开发对代谢疾病有辅助治疗效果的天然药物和保健食品是当前生物、生物医学、药学、营养学和食品科学等众多领域的重要研究内容之一。本文从实验和理论上系统研究了多酚的结构差异和外部条件对药物-蛋白质结合的影响作用，主要研究内容有两大方面:
　　 一:课题中主要研究了葡萄糖对黄酮与HPP（正常人血浆蛋白）结合能力的影响。对于结构不同的黄酮，葡萄糖的影响作用也不同:当在HPP中加入葡萄糖在37℃下孵育一天后，相比没有加葡萄糖的HPP，6-羟基黄酮与孵育一天后的HPP的结合能力下降了10.72倍;而槲皮素、7-羟基黄酮、山奈酚与孵育后的HPP的结合能力只是稍微的降低;杨梅素、白杨素、3，7-而羟基黄酮与孵育后的HPP的结合能力几乎没有变化。然而葡萄糖显著增强了3-羟基黄酮、芦丁、芹菜素与HPP的结合能力。当在HPP中加入葡萄糖孵育14天后，葡萄糖显著减弱了HPP与白杨索、山奈酚、槲皮素、与杨梅素的结合能力，结合能力分别降低了:6.17倍、7.94倍、14.12倍、和112.2倍;7-羟基黄酮、芦丁、3，7-二羟基黄酮、3-羟基黄酮、6-羟基黄酮与HPP的结合能力分别降低了1.35倍、1.58倍、1.58倍、1.9倍、和2.4倍;芹菜素与HPP的结合能力几乎没有什么变化。
　　 当HPP中加入一定量的葡萄糖在37℃下孵育14天后，葡萄糖显减弱了黄酮与HPP的结合能力，且对于那些疏水性较强的黄酮这种影响作用愈明显。对于那些具有较多H键供体/受体的黄酮来说，葡萄糖对这种结合力的影响较弱。即影响HPP与黄酮结合力的因素主要为:疏水作用力与H键作用。
　　 二:在考察了葡萄糖对黄酮—血浆蛋白结合力之间的影响之后，课题中研究了HSA以及葡萄糖对黄酮ABTS+自由基、超氧自由基清除能力的影响。结果发现:HSA、葡萄糖能降低黄酮清除ABTS+自由基与超氧阴离子自由基的能力。

目录

摘要

第一章 绪论

1．1 概述

1．2 人血清白蛋白

1．3 黄酮类化合物

1．4 药物与蛋白质相互作用研究的主要内容

1．4．1 结合常数和结合位点数的确定

1．4．2 药物与蛋白作用力类型的确定

1．5 黄酮抗氧化活性测定方法

1．6 本课题主要研究内容及其意义

第二章 葡萄糖对多酚-蛋白相互作用影响的结构-结合力和分子性质-结合力研究

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 仪器和试剂

2．2．2 溶液的配置

2．2．3 血浆蛋白的提取与预孵

2．2．4 荧光光谱

2．3 结果与讨论

2．3．1 葡萄糖对黄酮荧光色谱猝灭的影响

2．3．2 稳定常数(Ka)和结合位点数(n)

2．3．3 葡萄糖对HPP结合黄酮能力的影响

2．3．4 葡萄糖存在时随着孵育时间的变化，黄酮-HPP结合力的变化

2．3．5 葡萄糖对黄酮与孵育了14天后的血清的结合能力的影响

2．4 葡萄糖影响黄酮与HPP结合能力机制的探究

2．4．1 疏水作用力对黄酮与HPP结合力的影响

2．4．2 氢键相互作用力对黄酮与HPP结合的影响

第三章：血浆蛋白对黄酮抗氧化活性的影响

3．1 前言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器和试剂

3．2．2 溶液的配制

3．2．3 ABTS+自由基清除活性实验

3．2．4 超氧阴离子清除活性实验

3．3 结果讨论

3．3．1 HSA对黄酮清除ABTS+的影响

3．3．2 HSA对黄酮清除超氧阴离子的影响

3．3．3 本章小结

第四章 葡萄糖对黄酮清除ABTS+自由基以及超氧阴离子O2-自由基能力的影响

4．1 引言

4．2 实验部分

4．2．1 仪器和试剂

4．2．2 黄酮类化合物溶液的配置

4．2．3 TPP与HPP的制得

4．2．4 ABTS+自由基清除能力试验

4．2．5 超氧阴离子自由基清除能力实验

4．3 结果与讨论

4．3．1 葡萄糖对黄酮清除ABTS+自由基的影响

4．3．2 葡萄糖对黄酮清除O2-自由基的影响

4．4 本章小结

4．5 葡萄糖影响黄酮与血浆蛋白相互关系的可能机制

第五章 总结与展望

参考文献

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

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