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大熊猫肠道微生物群落指纹图谱分析和益生元成分对仔猪猪肠拟杆菌调节作用的定量研究

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摘要

本文采用了人菌群相关(HFA)仔猪模型,对饲喂了益生元(果寡糖)的仔猪采集其粪便样品,以粪便样品中的优势菌拟杆菌为研究对象,采用以双链特异性荧光染料SYBR-Green I的实时荧光定量PCR技术研究寡糖对仔猪肠道内拟杆菌的影响。首先,设计一含有拟杆菌基因组特异性片段的DNA序列的载体,根据其浓度计算其拷贝数,将其进行梯度稀释,作为标准样品,然后从样品中抽提粪便微生物总DNA,以此总DNA和标准样品为模板,以Bacteriods属特异性引物进行实时荧光定量PCR反应,再应用软件进行对Bacteriods基因组的拷贝数进行计算,从而得到了相关Bacteriods菌群数量的变化,并由此评价益生元(果寡糖)对此菌群水平的影响。实验结果表明,Bacteriods在对照组和试验组饲喂前后其种群水平的平均值为106copies左右/ng总DNA,Bacteriods在量上虽呈现出一定的波动,但波动的范围也仅限于一个数量级内的变化(Δ copies of Bacteriods DNA<0.6 );说明了本次试验所用的益生素(果寡糖)对Bacteriods种群影响不明显(P>0.21;student-T test at the 95%confidence level)。

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