aFGF、TGFβ1对猪牙乳头细胞体外增殖分化的实验研究

摘要

目的：本实验从猪的牙胚中分离得到牙乳头细胞进行体外培养，对其生物学特性进行研究，并用生长因子aFGF、TGFβ1单独或联合对其进行诱导，观察生长因子对猪牙乳头细胞体外增殖分化的影响，为组织工程构建牙髓牙本质复合体做前期的基础性工作。 方法：从新生猪的钟状期牙胚得到的牙乳头组织块采用DispaseⅡ和Ⅰ型胶原酶进行消化，所得牙乳头细胞在含10％FBS的DMEM/F12培养基中体外培养。采用MTT比色法和ALP细胞免疫化学法检测生长因子aFGF、TGFβ1单独或联合应用后对猪牙乳头细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响，并联合应用aFGF和TGFβ1诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。 结果：在上述实验条件下成功培养了猪牙乳头细胞，通过免疫组化染色鉴定其为间充质来源。用生长因子对细胞进行诱导发现：在一定的时间和浓度范围内，aFGF促进猪牙乳头细胞增殖, 抑制细胞ALP活性；TGFβ1抑制细胞增殖，提高猪牙乳头细胞的ALP活性；在两者联合应用下猪牙乳头细胞不仅增殖能力显著提高，还呈现出向成牙本质样细胞分化的特征：部分细胞出现细长的单侧突起；ALP活性明显增高，染色呈强阳性；细胞在矿化液的培养下可以形成典型的钙结节；并且通过RT-PCR检测到牙本质涎磷蛋白DSPP-mRNA的表达。 结论：猪牙乳头细胞能够在体外成功培养，联合应用aFGF和TGFβ1不仅可以促进细胞增殖，还能诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化，提示我们生长因子诱导后的猪牙乳头细胞可以作为构建牙本质牙髓复合体的种子细胞。