大剂量甲氨蝶呤分别联合顺铂、表阿霉素抑制MG-63骨肉瘤细胞效果的比较

摘要

目的：大剂量甲氨蝶呤（High dose methotrexate,HDMTX）与顺铂（Cisplatin，DDP）联用是治疗骨肉瘤有效的方案之一。通过比较HDMTX联用DDP与HDMTX联用表阿霉素（Epirubicine,EPI）对MG－63人骨肉瘤细胞的毒性作用，判断后者是否也能达到较好的效果。 方法：实验分别用HDMTX、DDP、EPI单药和HDMTX＋DDP、HDMTX＋EPI双药作用于MG-63骨肉瘤细胞，诱导其调亡和坏死。根据药物的血峰浓度（peak serum concentration，PSC）共设计10个实验组：⑴MTX 100PSC（HDMTX）；⑵DDP PSC；⑶DDP 10PSC；⑷EPI PSC；⑸EPI 10PSC；⑹HDMTX＋EPI PSC；⑺HDMTX +EPI 10PSC；⑻HDMTX+DDP PSC；⑼HDMTX+DDP 10PSC；⑽不加药对照组。利用光学显微镜观察不同药物组作用之后细胞的一般形态变化；通过MTT比色实验检测细胞对不同药物组的药物敏感性，计算其活性抑制率：抑制率（％）=（1－加药组平均OD值/对照组平均OD值）×100％；通过BrdU标记酶联免疫吸附方法检测不同药物组对细胞增殖能力的影响，计算各组的增殖抑制率，抑制率％=（1－试验组OD平均值/对照组OD平均值）×100％；用流式细胞仪检测不同药物组作用之后细胞的调亡率。上述实验最终结果均用金氏公式：Q=Ea+b/(Ea + Eb – Ea×Eb)分析判断合并用药后的效应并与单药组做比较，在细胞学水平上初步比较HDMTX联用DDP与联用EPI对MG－63骨肉瘤细胞毒性作用的差异。 结果：加入药物作用于MG-63细胞24小时后观察：光镜下可见对照组细胞呈长梭形或三角形，细胞结构清晰，贴壁牢；实验组细胞皱缩成圆形，细胞结构模糊，悬浮于培养液中，且药物高浓度组和两药联用组其细胞变小、变圆、漂浮的比例明显增多；HDMTX＋EPI组比HDMTX＋DDP组的变化更明显；MTT比色实验显示HDMTX分别与DDP、EPI联用时对细胞活力的抑制都有协同作用（Q值＞0.85）。HDMTX +EPI组比HDMTX +DDP组对MG-63细胞活力的抑制作用更强（低浓度组44.65±1.5％ vs 26.56±1.8％，p＜0.01；高浓度组72.96±0.7％ vs 58.98±0.6％，p＜0.01），；BrdU标记法的结果显示HDMTX和DDP联用对MG-63细胞增殖能力的影响为协同（Q值＞0.85），虽然HDMTX与EPI联用后作用发生拮抗（Q值＜0.85），但是仍然能获得较高的抑制率（69.65±2.9％，80.99±2.0％）；流式细胞仪检测的结果显示HDMTX和DDP联用与和EPI联用在诱导细胞调亡方面都有协同作用（Q值＞0.85），结果与MTT比色实验的一致。 结论：体外实验显示，在对MG-63骨肉瘤细胞活力抑制和诱导调亡方面HDMTX与EPI或DDP联用都有协同作用；在对抑制MG-63细胞增殖能力方面HDMTX与EPI联用后作用虽然为拮抗，但仍可达到较高的抑制率。两种组合效果相当。