盐酸克伦特罗分子印迹聚合物的制备及其应用研究

摘要

发展简单、快速、高效的新型样品前处理技术一直是动物源性食品中违禁药物残留检测技术研究的重点和难点。以分子印迹聚合物（MIPs）为基础填料的分子印迹固相萃取（MISPE），能从复杂样品中准确富集靶标分子，具有高特异性与高选择性、稳定性好和可重复使用等优点，已成为近年来食品安全检测领域最具有应用前景的技术之一。 盐酸克伦特罗（CLB）是一种代表性的β2-肾上腺受体激动剂，其滥用及在动物源性食品中的残留情况十分严重，对人类健康和食品国际贸易带来极大威胁，是我国最主要的违禁药物残留之一。我国目前CLB的检测常规方法主要有高效液相色谱（HPLC）、酶联免疫吸附测定（ELISA）等。然而，现有方法在检测动物性组织类样品时，存在样品前处理时间长、过程繁琐、检测结果假阳性率高或灵敏度低等严重缺陷。第II 页本论文利用分子印迹技术（MIT） 制备了对CLB具有高特异性、高选择性的MIPs，进而建立了MISPE程序，并与ELISA技术结合，建立了动物组织样品中CLB的联用快速检测方法，显著提高了对动物组织类样品的前处理效率和检测灵敏度。论文主要结果如下： 1、以克伦特罗为模板，以甲基丙烯酸为功能单体采用本体聚合的方法制备了针对CLB特异性的MIPs，利用索氏抽提、热处理和不同溶剂洗脱等一系列的后处理方法研究了从MIPs中去除模板残留的处理技术，GC/MS分析实验结果表明，经过处理的MIPs中模板残留量为1.0 ng/20 mgMIPs，仅为国际上报道的模板最低本底残留量（30 ng/60 mg MIPs）的十分之一。进一步分析评价结果证实MIPs具有较好的印迹效果（α=2.363），最大吸附量为9.6 μg/60 mg MIPs。同时，MIPs对目标分子CLB表现出最高的特异性（97.1％），对类似物特布他林、沙丁胺醇的交叉反应较低（13.0％和22.1％）。 2、基于获得的CLB-MIPs，建立了从复杂的动物组织类样品中选择性富集CLB的MISPE技术，上样液为磷酸溶液（3 mM，pH 3.4）：乙腈（30：70，v/v）；淋洗液为依次加入1 mL水，1 mL 2％乙酸乙腈，1mL 70％乙腈水溶液，1 mL乙腈；洗脱液为3 mL甲醇：乙酸（9：1，v/v），目标分子的回收率约为95.7％。 3、利用MISPE，从复杂动物组织类样品中选择性富集CLB，最后建立了与常规ELISA快速检测方法的联用技术。与传统基于C18小柱的样品前处理技术相比，MISPE与ELISA检测结合后，可在0.5，5.0及10.0 μg/kg三个水平的加标猪肉样品检测中具有更高的精确度和准确性，回收率均高于99.4％，灵敏度显著高于C18-ELISA和单独的ELISA检测方法的灵敏度。 这些工作克服了MISPE在实际应用中存在的本底残留高、无法与现有快速检测方法结合等不足，建立了猪肉等组织类样品中CLB的MISPE-ELISA检测联用技术，可替代现有的常规分析技术，确保检测灵敏度能够满足现有国家标准（GB/T5009.192-2003）的限量要求（0.5μg/kg）。更重要的是，该研究对于食品安全领域中其它违禁药物等小分子物质MIPs的制备和应用提供了一种有益的尝试和参考。