杂合性缺失及相关抑癌基因表达在胃肠道间质瘤中的作用研究

摘要

目的：研究胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)染色体9p21区域杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)及相关抑癌基因的表达，探讨它们与该肿瘤临床病理特征和预后因素之间的关系，以期寻找新的判断GIST生物学行为的指标。 方法：(1)收集我院1999—2007年收治的181例胃肠道间质瘤病例。分析其临床病理及随访资料，包括症状和体征、影像学检查、病理形态、免疫组化表现、手术治疗方案及生存状态，根据Fletcher推荐的生物学行为分级法进行分组，比较不同因素对生存率的影响并进行预后分析。(2)采用微卫星分析方法，检测51例GIST标本中染色体9P21区域D9S1751、D9S1846、D9S942和D9S1748四个微卫星位点的LOH现象，并且复习总结GIST的临床病理及随访资料，分析9P21区域LOH现象与GIST生物学行为的相互关系。(3)在已行LOH分析的51例GIST标本中，采用免疫组化技术，对发生高频LOH的D9S942位点相邻的CDKN2A抑癌基因，检测其产物p16蛋白的表达，分析p16蛋白的异常表达与GIST临床病理特征和预后的关系。 结果：(1)本组GIST患者的病变部位：胃107例(59.1％)，小肠51例(28.2％)，结直肠等其他部位23例(12.7％)；伴有肝转移7例。172例(95.0％)术前通过影像学检查明确病灶部位，其中胃镜53.5％(92/172)，CT34.3％(59/172)，内镜超声和胶囊内镜17.4％(30/172)。免疫组化检测显示CD117阳性171例(94.5％)，CD34阳性156例(86.2％)。依据Fletcher分级分为极低度恶性风险15例(8.3％)、低度恶性风险48例(26.5％)、中度恶性风险52例(28.7％)和高度恶性风险66例(36.5％)。176例(97％)患者经手术完整切除，其中26例(14％)行多脏器联合切除。患者1、3、5年生存率分别为95.2％、87.9％和78.5％。单因素分析显示：年龄、肿瘤大小、发病部位、核分裂像数目、Fletcher分级以及是否合并联合脏器切除对生存率有影响(P<0.05)；多因素分析显示Fletcher分级和肿瘤大小是影响患者预后的重要因素。术后有8例高危患者和3例复发转移患者服用伊马替尼后病情稳定。(2)51例GIST标本9P21区域LOH率分别为D9S175137.0％(10/27)、D9S184637.5％(12/32)、D9S94242.1％(16/38)和D9S174824.2％(8/33)，平均杂合性缺失率为35.2％。LOH表达在性别、年龄、发病部位和肿瘤大小方面无差别。随着肿瘤侵袭风险程度的增加，LOH率逐渐增高，在LOH率最高的D9S942位点，高度与非高度恶性风险组的LOH率有统计学差异(P<0.05)。高度恶性风险组至少有一个位点发生LOH的占90％(18/20)，高于中度恶性组的57.1％(8/14)和低度&极低度恶性组的33.3％(5/15)(P<0.05)。发生LOH的患者死亡率为25.8％(8/31)，而无LOH的患者死亡率为5.6％(1/18)。(3)发生高频LOH的D9S942位点相邻的CDKN2A抑癌基因，其产物p16蛋白在GIST患者中的阴性表达率为41.2％(21/51)，阳性率为58.8％(30/51)。p16表达在GIST患者的性别、年龄、肿瘤大小、Fletcher分级和发病部位方面无统计学差异，仅与核分裂像数目有统计学差异(P<0.05)。高度恶性风险组p16阴性表达率为60％(12/20)，明显高于中度恶性组的35.7％(5/14)和低度&极低度恶性组的23.5％(4/17)，而且高度与低度&极低度恶性组比较差异有统计学意义(P<0.05)。p16阴性表达组1、3、5年生存率分别为100％、84.8％和70，8％，p16阳性表达组1、3、5年生存率分别为100％、100％和92.0％，两组生存率差别有统计学意义(P<0.05)。 结论：(1)内镜和CT是GIST有效的主要诊断手段，CD117是GIST确诊的重要标记物。Fletcher分级法对预后评估有重要意义。外科手术仍是目前GIST的主要治疗方法，而分子靶向治疗是改善GIST预后的重要手段。(2)不同Fletcher分级的GIST中都有染色体9P21区域的杂合性缺失现象，以高度恶性侵袭行为的肿瘤中最高，提示LOH这一特征性细胞遗传学改变可能与GIST的恶性生物学行为有关。(3)发生高频率杂合性缺失的D9S942位点附近存在着重要的CDKN2A抑癌基因，其产物p16蛋白在GIST中随着恶性行为的增高而表达下降，生存率亦下降，p16表达是判断GIST预后的重要因子，CDKN2A抑癌基因可能参与GIST的发生发展。p16表达结合Fletcher分级法可能对具有高度复发转移风险的病例作出正确评估，有利于指导GIST术后分子靶向药物作为辅助治疗的应用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语表

声明

引言

第一部分181例胃肠道间质瘤的临床病理及预后分析

材料与方法

结果

讨论

第二部分胃肠道间质瘤染色体9P21区域的细胞遗传学分析

材料和方法

结果

讨论

第三部分 CDKN2A基因在胃肠道间质瘤表达的研究

材料和方法

结果

讨论

全文总结

参考文献

胃肠道间质瘤的遗传学改变

分子靶向治疗在胃肠道间质瘤治疗中的进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文