Merlin及其磷酸化在听神经瘤发病中的作用及其对肿瘤生物学行为的影响

摘要

听神经瘤起源于内听道前庭神经鞘膜，虽为良性肿瘤，但一旦增大，就会压迫脑干和小脑，危及患者生命，属于伴有“恶性行为”的良性肿瘤，多需要手术治疗。近年来听神经瘤的发病率较以往明显增高。在临床上听神经瘤表现出特殊的生物学行为，大约半数肿瘤在随访过程中增大，另有半数肿瘤静止生长甚至缩小，这对临床上听神经瘤治疗方案的选择提出很大的挑战，听神经瘤如果会继续生长，那就应该在肿瘤较小时手术；若预测肿瘤会停止生长，那就应该继续观察以避免手术后严重的颅神经并发症，但目前尚未找到这种特殊生物学行为的原因或预测因素。NF2基因位于染色体22q12，NF2基因的缺失会导致遗传性疾病神经纤维瘤病II型的发生。其主要表现型为双侧听神经瘤。而在散发型听神经瘤中也检测到NF2基因突变。由于散发型听神经瘤占所有听神经瘤病例95％以上，因此，对于散发型听神经瘤发病和临床生物学行为的机制研究更具意义。 本文研究了听神经瘤中细胞凋亡相关通路及其与merlin、磷酸化merlin的关系。P53作为细胞内检测DNA损伤的最重要的因子，在细胞生长增殖方面起着重要的调控作用(14)。P53通过影响p21的功能调节细胞周期由G0/G1进入S期，p53蛋白不稳定，在胞浆内迅速与mdm2的蛋白产物p90结合而失活(14)。我们通过对p53的研究显示在听神经瘤标本与正常对照中p53的表达有差异，且p53与merlin有共表达的现象。从预实验中可以看出，Merlin对JNK通路、CDK-Cyclin D1以及p53通路有调控作用。听神经瘤组织中，野生型Merlin的含量低而突变型Merlin的含量高。那么是什么原因使听神经瘤仍然是良性肿瘤而不是恶性肿瘤？因此我们考虑用细胞凋亡酶Caspase家族中的关键酶Caspase3做预实验，结果发现在正常组织中Caspase3以无活性的形式存在，而在听神经瘤组织中，Caspase3无一例外的都是以活性形式表达，提示听神经瘤组织凋亡活跃。这可能就是临床上听神经瘤生长缓慢的原因，更提示凋亡活性的不同可能是决定听神经瘤生长速度不一的原因。对听神经瘤标本的研究发现，磷酸化merlin高表达的听神经瘤往往是大肿瘤，而小肿瘤中磷酸化merlin低表达或不表达，且磷酸化merlin的表达程度与Ras通路相关信号一致。这项研究结果提示肿瘤增大的原因可能与merlin磷酸化导致Ras癌基因生长信号传导通路活化有关，揭示了听神经瘤不同生物学行为的分子机制。本文通过组织蛋白水平研究探讨merlin及其磷酸化在听神经瘤发病和生物学行为机制后，将研究结果用细胞系实验加以证实。将携带NF2WT(Wild Type)，S518A突变，S518D突变和空载体(Vector)的质粒导入成纤维细胞(NIH3T3)细胞系，建立merlin持续磷酸化和melrin持续脱磷酸化的细胞系，观察细胞生长速度，生长特征，比较生长曲线。结果发现merlin抑制细胞生长，而磷酸化merlin促进细胞生长。研究表明：merlin蛋白能抑制细胞生长，而merlin磷酸化后则丧失了抑制细胞生长的活性，促进肿瘤细胞增殖，其作用是通过诱导Ras-Raf-MEK-ERK-JNK通路的磷酸化活性以及细胞周期蛋白活性而实现的。Merlin与p53共表达，可能参与维持p53的稳定性功能。在听神经瘤中，磷酸化merlin促进肿瘤增生，是临床上肿瘤不同生物学行为的原因。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章merlin及其磷酸化在听神经瘤组织中的表达及其与听神经瘤发病机制的关系

1、绪言

2、对象与方法

3、结果

4、讨论

参考文献

第二章merlin及其磷酸化对听神经瘤生物学行为的影响及其机制

1、绪言

2、对象与方法

3、结果

4、讨论

参考文献

第三章merlin及其磷酸化对细胞周期和细胞凋亡的影响及其机制

1、绪言

2、对象与方法

3、结果

4、讨论

参考文献

第四章听神经瘤细胞培养

1、绪言

2、对象与方法

3、结果

4、讨论

结论

附录

致谢

在研期间主要承担科研项目

在研期间发表相关文章