痣样基底细胞癌综合征致病基因突变及功能研究

摘要

目的:研究多个痣样基底细胞癌综合征(NBCCS)和家族性角化囊性瘤家系中PTCH基因的突变；在此基础上,运用生物信息学方法分析预测PTCH基因突变所导致的蛋白功能改变；并进一步研究确定各家系先证者肿瘤组织样本中Hedgehog信号转导通路的激活情况。
　　 方法：
　　 1、采用国际公认的诊断标准收集多个NBCCS和家族性角化囊性瘤家系。
　　 2、采用PCR和直接测序方法检测NBCCS和家族性角化囊性瘤家系中PTCH和PTCH2基因的突变。
　　 3、采用多种生物信息学方法分析预测PTCH基因突变所导致的PTCH蛋白功能改变。
　　 4、采用免疫组织化学方法检测各家系先证者肿瘤组织样本中Hedgehog信号转导通路关键蛋白GLI的表达情况。
　　 结果：
　　 1、本研究共收集到家系7个,其中NBCCS家系5个,家族性角化囊性瘤家系2个。
　　 2、在NBCCS家系中,检测到PTCH基因上一个新的整码突变(c.1537_1539delGAT)或(c.1540_1542delGAT),一个无义突变(p.W926End)；在家族性角化囊性瘤家系中,检测到PTCH基因上一个错义突变CGA>GGA(p.G1093R),一个新的剪切突变c.339+1G>C(NM000264.3,序列中启动密码子ATG的A作为开始计数的第一个碱基)；在收集到的家系中,未检测到PTCH2基因突变。
　　 3、突变点p.513delD或p.514delD可能影响PTCH蛋白的跨膜区域；突变点p.W926end截断PTCH蛋白的第二个功能域一Patch功能域,可能影响这个功能域行使Hedgehog受体激活功能；突变点p.G1093R可能影响PTCH蛋白的活性位点。
　　 4、所有收集到的家系先证者肿瘤组织样本中,均检测到Gli1和Gli2蛋白的表达,其表达在各家系之间无明显差异。
　　 结论：
　　 同欧美报道有所不同,本研究所收集到的NBCCS家系患者主要和首要就诊因为是颌骨的多发性角化囊性瘤,家族性角化囊性瘤家系患者症状仅仅为易复发的多发性颌骨角化囊性瘤；PTCH基因上的不同突变可能通过不同方式影响了PTCH蛋白的功能；在三个NBCCS家系中未检测到PTCH基因突变,推测有其它基因也参与了NBCCS的发生；在所有家系先证者肿瘤样本中,均存在Hedgehog通路的激活,此通路关键蛋白可成为NBCCS和角化囊性瘤的候选治疗靶点。

目录

文摘

英文文摘

缩略语表

1.第一章绪论

2.第二章NBCCS和家族性角化囊性瘤家系收集

前言

第一节NBCCS家系的收集

第二节家族性角化囊性瘤家系的收集

本章小结

3.第三章NBCCS和家族性角化囊性瘤家系PTCH基因突变检测

前言

第一节NBCCS家系中PTCH基因扩增和测序分析

第二节家族性角化囊性瘤家系中PTCH基因扩增和测序分析

第三节NBCCS家系中PTCH2基因扩增和测序分析

本章小结

4.第四章PTCH基因突变后蛋白功能改变预测分析

前言

第一节NBCCS家系PTCH突变后蛋白功能改变预测分析

第二节家族性角化囊性瘤PTCH突变后蛋白功能预测分析

第三节两个家族性角化囊性瘤家系中PTCH基因突变比对

本章小结

5.第五章NBCCS和家族性角化囊性瘤家系中Hedgehog相关蛋白的检测

前言

第一节NBCCS家系先证者肿瘤样本中Gli蛋白表达检测

第二节家族性角化囊性瘤家系先证者肿瘤样本中Gli蛋白表达检测

本章小结

全文结论

参考文献

致谢

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