肾透明细胞癌中硬脂酰辅酶A去饱和酶1蛋白功能及其表达调控机制的研究

摘要

肾癌是泌尿系最常见的肿瘤之一，在泌尿系肿瘤中位居第二，具有组织多样性，发病机制尚不清楚，肾癌恶性程度高，不易早期发现，确诊时约35％的患者己有转移，2年死亡率高达95%，约40%患者术后转移或复发，3年存活率小于5%。近几年来，肾癌的发病率和死亡率每年都在递增。对于局限性的肾癌，最主要的治疗犯法是外科手术进行根治或者部分切除手术。即使进行了手术，局限性肾癌患者仍有25%至30%会复发或者转移。由于肾癌先天性对放疗、化疗都不敏感，因此对于晚期肾癌，放疗、化疗不作为常规辅助治疗。近年来晚期肾癌的生物治疗，靶向治疗取得了一定的成绩，但疗效仍很有限，有待进一步提高。肾癌一般分为五种病理亚型，分别是透明细胞癌、乳头状细胞癌、嫌色细胞癌、集合管癌和未分类肾细胞癌。其中超过80%的是透明细胞癌。因此进一步理解肾癌，尤其是肾透明细胞癌的发生、发展机制，对于更好的防治这一恶性疾病有重要意义。
　　大部分恶性肿瘤表现出代谢紊乱的特征，主要体现为异常高效率的有氧)酵解和大分子物质的高速合成，涉及到 DNA、蛋白质和脂质。脂质合成的一个基本过程是形成饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸，这两种脂肪酸是哺乳细胞脂质中最主要的成分，用于构建膜结构中的磷脂、二酰基甘油、二酰基甘油、胆固醇酯。饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的比例和分布在细胞严格调控，处于相对固定的平衡状体。饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的比例平衡一旦发生改变，细胞的一系列功能会发生改变。硬脂酰辅酶A去饱和酶是调节饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的比例的关键酶之一，是位于内质网的跨膜蛋白。其主要功能是催化棕榈酰辅酶A和硬脂酰辅酶A为棕榈油酰辅酶A和油酰辅酶A，即将饱和脂肪酸催化成单不饱和脂肪酸。近几年来的研究发现。硬脂酰辅酶 A去饱和酶不仅仅在一些代谢性疾病中起着关键角色，其在肿瘤的生存、增殖、恶性转化的过程中有关键作用。目前。硬脂酰辅酶 A去饱和酶在肾透明细胞癌的表达以及对它生物活性作用未见相关报道。
　　第一部分 SCD1在肾透明细胞癌中的表达及临床意义
　　目的：研究SCD1在肾透明细胞癌中的表达，并分析其与临床病理特征及预后的关系。
　　方法：采用Western Blot法检测44例透明细胞癌组织、透明细胞癌细胞株和18例相应正常组织、正常肾小管上皮细胞中 SCD1蛋白的表达，免疫组化检测78例肾透明细胞癌石蜡切片和相应30例癌旁正常组织中SCD1蛋白的表达，并结合临床资料进行分析。
　　结果：Western Blot结果显示肾透明细胞癌组织和细胞株中SCD1蛋白的表达明显高于正常组织（P<0.05）。免疫组化结果显示SCD1在26%（20/78）肾透明细胞癌中表达，而30例癌旁正常组织中均不表达，两者比较有显著性差异（P<0.05）。SCD1的高表达与病理分级（P<0.05）和临床分期（P=0.03）有关。
　　结论：与正常组织相比，SCD1蛋白在肾透明细胞癌组织中的都有过表达。SCD1的表达还与肿瘤的分级和分期呈正相关。
　　第二部分 SCD1表达调控以及对肾透明细胞癌中生物学作用
　　目的：研究SCD1在肾透明细胞癌中的调控机制以及和HIF-2a对肿瘤的共协调生物活性作用
　　方法：肾癌786-O细胞株在缺氧环境中（(0.5%)培养，检测不同时间段SCD1和HIF-2a蛋白水平的表达；RNAi基因沉默肾癌细胞HIF-2a的表达，检测缺氧环境中SCD1蛋白水平的表达；RNAi基因沉默肾癌细胞SCD1的表达，Western Blotting检测HIF-2a蛋白水平的表达变化；应用tunel和DAPI双染色、软琼脂集落形成、划痕试验和Matrigel侵袭实验等试验方法，检测SCD1和HIF-2a基因共沉默对786-0细胞体外生长、非依赖贴壁生长能力、迁移、侵袭能力影响；将SCD1和HIF-2a基因共沉默和未沉默的肾癌细胞注射入裸鼠皮下，建立肾癌裸鼠模型，观察其对肾癌发生发展的影响；
　　结果： Western Blot结果显示肾透明细胞癌组织和细胞株中SCD1蛋白的表达明显高于正常组织（P<0.05）。缺氧环境下，SCD1和HIF-2α蛋白表达均增高、当HIF-2α抑制后，SCD1表达相应减少。RNAi基因沉默肾癌细胞SCD1的表达后，HIF-2α和P-Akt表达均减少。SCD1和HIF-2a基因共沉默后，786-0细胞凋亡增加，非依赖贴壁生长能力下降（P＜0.05）,划痕试验和Matrigel侵袭实验显示共抑制细胞覆盖划痕区域减少（P＜0.05），穿过transwell盒数目减少（P＜0.05）。裸鼠试验显示形成肿瘤体积较未抑制细胞减小（P＜0.05）。
　　结论：HIF-2α诱导的SCD1通过正反馈上调 HIF-2α来促进肾透明细胞癌的发病进程。共抑制HIF-2α和SCD1能促进肾透明细胞癌凋亡、细胞体外生长、集落形成能力、粘附能力与迁移、侵袭能力下降，减少体内成瘤性。

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引言

第一部分 SCD1在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

1 材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 SCD1表达调控以及对肾透明细胞癌中生物学作用

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述1: 肿瘤从头合成脂肪酸和关键酶的研究进展

综述2: 缺氧诱导因子与肾脏肿瘤

致谢