中药提取物(厚朴酚、雷公藤甲素)递药系统的优化及对卵巢癌细胞株的作用机制研究

摘要

中药是我国传统医学的瑰宝,越来越多的基础与临床实践资料表明,在肿瘤的治疗上确有显著疗效,在某些方面可弥补西医的不足,无论是在抑制杀伤肿瘤细胞,诱导细胞分化。促进凋亡,调整机体免疫功能,改善症状与体征,还是减轻放化疗毒副作用或对肿瘤患者的调理,中药都发挥着重要作用。故深入研究中药的抗瘤作用及机制具有重要的临床意义和应用价值。
　　中药雷公藤是卫矛科雷公藤属木质藤本植物,主要产于中国南部地区,其提取物的成分很复杂,雷公藤红素(Tripterine)、雷公藤内酯酮(Triptonide)、雷公藤甲素(Triptolide)和雷公藤乙素(Tripdiolide)是其主要活性成分。有研究报道,雷公藤甲素具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤和抗生育等多种药理作用,临床上常用于治疗风湿性疾病、自身免疫性疾病、器官移植、肾病、哮喘、肿瘤等。本论文制备了载雷公藤甲素的聚合物胶束,并建立了相应的质量标准,评价了其抗肿瘤作用,体内药动学特性和组织分布情况,为制备一种治疗实体瘤的雷公藤甲素新制剂提供实验依据。此外,我们还对另一中药提取物厚朴酚进行初步研究,体内外测定方法的建立,药效学初步评价。全文完成的工作包括以下几方面:
　　第一部分初步探究了中药提取物厚朴酚的体内外测定方法,并在卵巢癌细胞、宫颈癌上呈现一定的肿瘤抑制率,尤其是宫颈癌,药效学数据显示该提取物有待进一步研究的价值。
　　第二部分以Pluronic P105材料为胶束载体,应用薄膜分散法制备了雷公藤甲素胶束,并建立相关体外测定方法。经试验,测定的色谱条件如下:色谱柱:Gemini5gm C18(150 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-水=30:70,v/v;检测波长:224 nm;柱温:30℃;流速:1.0 ml/min;进样量:20μL。此外,体外表征显示雷公藤甲素胶束为有白色乳光的透明溶液。透射电镜(TEM)负染照片显示雷公藤甲素胶束呈现具有核-壳结构的规则球形粒子,粒度大小较一致。纳米粒度仪测得胶束的平均粒径为(84.3±6.4)nm,Zeta电势为(-7.19±1.1)mv,平均包封率为(62.1±3.3)％,平均载药量为(1.5±0.2)％。制备的胶束制剂24h内稳定性良好,体外释放试验显示该胶束具有一定的缓释特性,28h内累积释放量达才65％。
　　第三部分对制备的雷公藤甲素胶束进行动物体内的药动学研究,药动学数据显示其体内过程呈缓慢释放的过程,血药浓度可持续16h之久,而普通的注射剂在体内快速代谢,在4h左右已经低于检测限,注射剂及胶束的药动学参数如下:Cmax:1989.3±217.2(ng·ml-1);727.6±165.2(ng·ml-1);AUC0-t:641.2±131.7(ng·h·mL-1);3012.4±433.7(ng·h·mL-1);AUC0-∞:718.6±144.4(ng·h·mL-1);4218.1±477.3(ng·h·mL-1)。由药动学参数可知,胶束剂型可明显增加雷公藤的体内摄取,其AUC是注射剂的5～6倍。
　　第四部分组织分布研究显示大鼠尾静脉注射200 ug/kg的雷公藤甲素胶束及注射剂后,雷公藤甲素在动物体内分布广泛、迅速。在所有组织中注射剂的的雷公藤甲素含量随着时间的延长而减少,而胶束组中由于胶束自身的缓释特性致使各个器官呈现一定的蓄积作用。这进一步佐证了胶束剂型在大鼠体内的缓释作用。
　　第五部分雷公藤甲素的抗肿瘤活性研究及其机理探讨,研究通过雷公藤单药及雷公藤Pluronic P105胶束处理上皮性卵巢癌细胞,通过cck8流式细胞术检测细胞凋亡生长抑制情况,westemblot检测药物作用后细胞株凋亡相关蛋白的表达变化,transwell及划痕实验分析药物对细胞侵袭、转移能力的影响,研究发现雷公藤单药及胶束均能引起细胞的凋亡,并能抑制细胞的侵袭和转移