硝酸酯在DSS诱导的急性结肠炎小鼠模型中的治疗作用

摘要

背景：炎症性肠病（IBD）是慢性肠道炎性紊乱疾病，伴有过量的炎性因子及黏附分子及活性氧反应的产生。IBD可能为肠道粘膜屏障缺陷引起对栖生菌的异常免疫反应，引起促炎反应亢进，抑炎反应下降，炎症平衡失调，促炎炎症因子的过量产生，进一步引起肠道损伤，形成恶性循环。
　　目前治疗IBD的药物仍较单一，最新的生物制剂虽然疗效较好，但是价格昂贵，给病人造成较重经济负担，使开发低价常用药物成为可行。硝酸酯口服后在体内代谢生成单硝酸酯，后者生成NO，激活鸟苷酸环化酶，使平滑肌内cGMP增多，引起血管平滑肌松弛。一氧化氮在肠道屏障和免疫功能起到重要作用，作为维持胃肠粘膜的稳态调节剂，具有调节粘膜血流灌注，以及调控微血管和内皮通透性的作用。还可以下降白细胞的黏附，阻止巨噬细胞的激活，阻止Th1类炎症因子的被激活。
　　肠道一氧化氮（NO）产生受损，可能在IBD的起因，以及进展起重要作用。本实验通过对一系列指标的观察，利用 DSS化学诱导结肠炎小鼠模型，讨论硝酸酯在急性实验性小鼠结肠炎中的作用。
　　目的：
　　1利用DSS建立小鼠结肠炎模型
　　2探讨硝酸酯对DSS实验性小鼠急性结肠炎的治疗效果，并对其机制进行初步探讨。
　　方法：
　　1．20只清洁级BABL/c雌性小鼠，6-8周龄，随机分为模型组和对照组，对照组正常饮水一周，实验组连续饮用4％DSS溶液一周，观察小鼠体重、毛发、解便等大体情况，一周后处死小鼠，分离小鼠结肠，予4%甲醛固定，行HE染色，光镜下组织学评定。
　　2．60只清洁级BABL/c雌性小鼠，6-8周龄，随机分为结肠炎模型组，硝酸酯治疗组与正常对照组，每组各20只，小鼠急性结肠炎模型采用口服葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液完成,治疗组DSS溶液中加入硝酸酯，对照组与正常饮水处理。观察小鼠体重、毛发、解便等大体情况，与实验第三天、第七天处死小鼠，分离小鼠结肠，予4%甲醛固定及液氮储存，行HE染色，光镜下组织学评定，免疫组化测定肠道组织MPO表达，WB测定小鼠结肠NF-κB,i NOS,TNF-α的表达。
　　结果：
　　1 DSS引起的小鼠结肠炎主要表现为腹泻、血便、体重下降、活动减少、毛发失光泽等。而光镜下组织病理学变化,主要表现为结肠粘膜屏障的破坏，引起全结肠多发性小溃疡，隐窝破坏及异常隐窝，继发黏膜、黏膜下炎症，少数病灶炎症可侵及黏膜层，浸润的炎症细胞以中性粒细胞为主，伴少量淋巴细胞和单核细胞。
　　2硝酸酯减轻小鼠结肠炎的疾病活动指数(DAI)，与模型组结肠炎组相比，硝酸酯治疗组小鼠结肠组织病理损伤明显减轻（P＜0.05），白细胞聚集减少，髓过氧化物酶（MOP）活性明显降低（P＜0.05），NF-κB表达下调（P＜0.05），结肠局部促炎因子TNF-α的产生减少（P＜0.05）。
　　结论:
　　1 DSS化学诱导结肠炎模型适合结肠炎药物治疗研究
　　2硝酸酯可以用于治疗由DSS诱导的小鼠急性肠道损伤：
　　2.1口服硝酸酯，通过提供外源性NO，逆转实验性结肠炎的结肠一氧化氮水平，减少iNOS的产生，降低白细胞的募集及结肠MPO活性，并减少局部促炎因子TNF-α的释放，从而改善实验性结肠炎的临床症状及组织学。
　　2.2硝酸酯保护结肠的作用也可能通过调节 NF-κB的表达，下降iNOS、TNF-α起作用。

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中英文缩略词表

绪论

一、IBD病因概述[1]

二 IBD的药物治疗

参考文献

第一部分 DSS诱导小鼠急性结肠炎模型的建立

摘要

Abstract

引言

1. 实验材料

2 实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 硝酸酯治疗DSS化学诱导的小鼠急性结肠炎

引言

1材料和方法

2 实验方法

统计学方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文