miR-29a在胶质瘤迁移、侵袭和增殖中的作用研究

摘要

第一部分miR-29a在胶质瘤细胞和组织中的表达
　　目的：分别检测 miR-29a基因在临床胶质瘤组织和实验细胞株中的表达水平及其与不同级别胶质瘤的关系。
　　方法：1.通过提取神经小胶质细胞株 N9和星形胶质母细胞瘤细胞株 U87的总microRNA,用荧光实时定量PCR的方法检测miR-29a在这两种细胞株中的表达量。2.通过收集近2年经病理检查确诊的20例临床胶质瘤组织标本以及10例患者正常脑组织标本（含脑挫裂伤和癫痫患者开颅手术治疗者），均分别提取总 RNA；应用荧光实时定量 PCR的方法检测miR-29a在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达情况。并进一步比较了miR-29a表达情况与不同级别胶质瘤的相关性。
　　结果：1.以神经小胶质细胞N9作为对照，星形胶质母细胞瘤细胞株U87中的miR-29的表达量要显著高于对照组的含量(P<0.01）；2.以正常脑组织作为对照，临床胶质瘤脑组织标本中的 miR-29的表达量也显著高于对照组的含量(P<0.01），且临床分级越高，其表达水平越高。
　　结论： miR-29a在胶质瘤细胞株U87和胶质瘤组织中的表达水平显著高于正常细胞和组织。而且miR-29a的表达水平与其临床恶性分级密切相关，临床分级越高，其表达水平越高。
　　第二部分miR-29a对U87细胞迁移、侵袭和增殖的影响
　　目的：观察 miR-29a对胶质瘤细胞株U87迁移、侵袭和增殖能力的影响，为进一步探索研究脑胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖的机制以及为胶质瘤临床诊治提供理论基础。
　　方法：分别通过转染 miR-29a模拟物提高 U87细胞内 miR-29a的表达水平，转染miR-29a抑制剂下调U87细胞内miR-29a的表达水平；观察转染了荧光素基团标记的FAM-SiRNA在荧光显微镜下呈现的绿色荧光判断转染效率；然后通过荧光实时定量PCR技术分别检测两组转染后U87细胞中 miR-29a的表达水平；应用细胞划痕实验、Transwell小室实验和MTT实验检测miR-29a对U87胶质瘤细胞的迁移、侵袭以及增值能力的影响。
　　结果：1.荧光显微镜下观察发现，转染了荧光素基团FAM-SiRNA的绝大多数细胞都呈现绿色荧光。同时应用荧光实时定量PCR方法进一步确定转染了miR-29a模拟物和抑制剂后U87细胞内miR-29a的表达水平。2.转染miR-29a模拟物的U87细胞在细胞划痕实验中的迁移能力增强，而转染miR-29a抑制剂的U87细胞则迁移能力受到抑制。3.转染miR-29a模拟物的 U87细胞在Transwell小室实验即细胞侵袭实验中迁移侵袭的细胞数目显著上升，而转染了miR-29a抑制剂的U87细胞则迁移侵袭的细胞数目显著减少。4. MTT实验结果表明转染了miR-29a模拟物的U87细胞的增殖能力显著增强，而转染了miR-29a抑制剂的U87细胞的增殖能力则受到显著的抑制。
　　结论：1. miR-29a模拟物和抑制剂的转染效率很高，可以有效的上调或下调U87细胞内miR-29a的表达量。2. miR-29a具有调节胶质瘤细胞迁移，侵袭和增殖的作用。

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前言

第一部分miRNA-29a在胶质瘤组织和细胞中的表达

1资料与方法

2方 法

3 结 果

4 讨 论

第二部分miR-29a对胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖的影响

1. 材料、试剂和设备

2 方 法

3 结 果

4 讨 论

全 文 结 论

参考文献

附录：胶质瘤与水通道蛋白的研究现状

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文