多奈哌齐对大鼠纹状体内乙酰胆碱和Y-氨基丁酸的影响

摘要

在动物体内存在有种类繁多，功能各异的神经递质。中枢神经递质中的乙酰胆碱（Acetylcholine）伽马氨基丁酸（GABA），是非常重要的生物活性成分，在调节生物体的功能上起着非常重要的作用，尤其是在生物体的对事物的认知、记忆等诸多方面。很多证据表明，乙酰胆碱、伽马氨基丁酸异常可能引起多种疾病，例如由于缺少引起的老年痴呆症等。鉴于乙酰胆碱、伽马氨基丁酸及其各自的代谢产物具有重要的生理学作用，故其生理浓度变化的测量可作为疾病进展或药物治疗的评估指标，这一功能使得这类物质成为药物研发中非常重要的生化标记物。但是在利用活体动物直接观测乙酰胆碱、伽马氨基丁酸的变化较为困难，为了解决这一难题本试验利用微透析技术，口服给予多奈哌齐观测其对大鼠纹状体区神经递质的影响。通过脑立体定位技术与脑微透析仪取样技术对清醒状态下自由活动的大鼠取样采用离线超高效液相色谱串联质谱法检测取自大脑纹状体的透析液内乙酰胆碱、伽马氨基丁酸的浓度，并实现了同时检测两种化学递质的定量技术。在新的药物研发过程中，来自生物样本的疾病体采集物中的生化标记物常被用作诊断和药物疗效评估的有效方式。研究多奈哌齐对大鼠大脑纹状体内神经递质乙酰胆碱伽马氨基丁酸的变化规律，为微透析技术在医药研发中的工业化应用，提供具体可靠的技术手段和参考，以便快速提高研发效率和降低研发成本。
　　本次实验建立了中枢神经递质中的乙酰胆碱、伽马氨基丁酸（超高效液相色谱串联质谱的测定方法。结果：线性关系、方法精密度好、准确度高，符合分析要求。采用增量法和减量法考察待测浓度对探针回收率的影响。结果：微透析探针回收率基本不受浓度影响，且体内回收率稳定性良好。结论:应用UPLC- MS/MS技术建立使用胆碱酯酶抑制剂测定大鼠脑微透析液中乙酰胆碱、伽马氨基丁酸的方法迅速、灵敏、可靠。

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第一章 前言

1.1微透析技术

1.2 微透析取样的校正及定量

1.3探针回收率的影响因素

1.4 微透析取样与分析技术的联用分析

第二章 ACh和GABA生物分析方法超高效液相色谱条件建立

2.1 仪器和试剂

2.2 色谱质谱条件建立

2.3 数据的生成及计算

2.4 结果和讨论

2.5 讨论

第三章 微透析探针体外回收率测定

3.1 仪器和试剂

3.2 化合物浓度对回收率的影响

3.3 讨论

第四章 灌注液成份对大鼠脑部植入探针的回收效果影响

4.1 仪器和试剂

4.2 微透析实验

4.3 讨论

第五章 多奈哌齐经口服给药后对大鼠纹状体内乙酰胆碱、Y-氨基丁酸的影响考察

5.1 仪器和试剂

5.2 实验动物的饲养与管理

5.3 手术及护理

5.4 多奈哌齐的配置

5.5 实验方案及分析过程

5.6 试验结果分析

5.7 讨论

结论

参考文献

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致谢

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