七氟醚对小鼠发育期神经毒性的机制研究-GSK3β活化/Tau蛋白过度磷酸化

摘要

【目的】：
　　本课题主要考察多次或单次七氟醚麻醉对发育期小鼠远期认知功能的影响，并探讨Tau蛋白过度磷酸化及其上下游机制在其中的作用。
　　【方法】：
　　1.6日龄（P6）野生型C57BL/6小鼠，随机分成4组：组1，（3%七氟醚+60%氧气）2h×3天；组2，60%氧气2h×3天；组3，（3%七氟醚+60%氧气）2h；组4，60%氧气2h。然后进行分子生物学或者行为学检测。行分子生物学检测的幼鼠，在麻醉后即刻或2天用Western-blot检测海马脑区Tau蛋白磷酸化水平、相关激酶和相关磷酸酯酶PP1表达的变化；进行行为学试验的幼鼠继续饲养，至P31开始行Morris水迷宫（MWM）检测小鼠的空间学习记忆功能。
　　2. P6 Tau基因敲除幼鼠随机分成2组：组1，（3%七氟醚+60%氧气）2h×3天；组2，60%氧气2h×3天。接受3次七氟醚麻醉后行分子生物学或行为学检测。用于检测分子的小鼠在麻醉后即刻用Western-blot测定海马脑区GSK3β和P-GSK3β（Ser9），用ELISA和Western-blot测定海马脑区IL-6的表达变化；用于行为学检测的小鼠，麻醉后继续正常喂养至P31行MWM试验。检测小鼠的空间学习记忆功能。
　　3. P6野生型C57BL/6小鼠，随机分成4组：组1，氧气+生理盐水；组2，七氟醚+生理盐水；组3，七氟醚+氯化锂；组4，氧气+氯化锂。幼鼠在每次处理前30分钟腹腔注射氯化锂（100mg/kg）或等体积的生理盐水，处理后行分子生物学或者行为学检测。行分子生物学实验的幼鼠，在麻醉后即刻用Western-blot或ELISA检测海马脑区相关分子表达的变化；进行行为学试验的幼鼠继续饲养，至P31开始行MWM检测小鼠的空间学习记忆功能。
　　【结果】：
　　1.3次七氟醚麻醉组野生型小鼠的远期认知功能明显差于对照组（吸3次氧气），具体表现为：在定位航行试验中，七氟醚组小鼠找到平台的潜伏期要显著长于对照组小鼠；在空间探索试验中，七氟醚组小鼠穿越平台的次数也明显少于对照组小鼠。单次七氟醚麻醉组小鼠的远期空间认知功能与对照组没有显著差异。
　　2.3次七氟醚麻醉组野生型小鼠在麻醉后即刻、麻醉后2天海马脑区Tau蛋白磷酸化（AT8）水平显著高于对照组，而T-Tau的表达与对照组比较没有明显差异。单次七氟醚麻醉小鼠海马脑区的Tau蛋白磷酸化水平在各个时间点与对照组比较均没有显著差异。
　　3.接受3次七氟醚麻醉的野生型小鼠海马脑区Tau蛋白磷酸化相关激酶的变化情况。3次麻醉组小鼠海马脑区P-GSK3β（Ser9）的水平显著低于对照组，而GSK3β总蛋白水平在两组间没有差异。其它Tau蛋白磷酸化相关的激酶JNK1/2、P-JNK1/2、ERK1/2、P-ERK1/2、CDK5、P35、P25的表达在两组之间均没有明显差异。
　　4.接受3次七氟醚麻醉的野生型小鼠海马脑区磷酸酯酶PP1的表达水平与对照组没有明显差异。
　　5．Tau基因纯合敲除幼鼠接受3次七氟醚麻醉显著降低其海马脑区P-GSK3β（Ser9）的水平，但不引起炎症介质（IL-6）的升高和远期认知功能的损害。
　　6.氯化锂能够逆转3次七氟醚麻醉所致的野生型小鼠远期行为学和急性期相关分子表达的改变。
　　【结论】：
　　七氟醚多次麻醉可导致发育期神经毒性，引起脑内炎症因子（IL-6）的升高和远期学习记忆功能的障碍，其机制可能与GSK3β激活所致的Tau蛋白过度磷酸化有关，调节GSK3β的活性可能是防治七氟醚发育期神经毒性的潜在靶点。

目录

缩略词表

绪论

第一部分 单次和多次七氟醚麻醉对幼年小鼠远期学习记忆能力的影响

1.前言

2. 材料与方法

3实验结果

4．小结

5.讨论

第二部分 多次或单次七氟醚麻醉对幼鼠海马脑区tau蛋白磷酸化水平、相关激酶和磷酸酯酶表达的影响

1.前言

2. 材料与方法

3实验结果

4．小结

5.讨论

第三部分GSK3β活化/Tau蛋白过度磷酸化参与七氟醚发育期神经毒性—Tau基因敲除小鼠和氯化锂的干预研究

1.前言

2. 材料与方法

3实验结果

4. 小结

5. 讨论

全文的结论

本研究的创新点

研究的意义

需要进一步研究的问题

参考文献

研究成果：

致谢

综述：全身麻醉药致发育期神经毒性的研究进展

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