p54nrb/NONO通过SREBP-1a调节脂质代谢促进乳腺癌增殖机制的研究

摘要

第一部分、p54nrb/NONO通过SREBP-1a调节脂质代谢促进乳腺癌增殖机制的研究
　　目的:研究p54nrb/不含 POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白（non-POU-dormain-containing octamer-bindingprotein，NONO）通过胆固醇调节元件蛋白（Sterol regμlatory element-binding proteins-1a，SREBP-1a）调节脂质代谢，促进乳腺癌增殖的分子机制。
　　方法：应用免疫组化检测p54nrb/NONO和SREBP-1蛋白在乳腺癌组织中表达情况，统计分析两种蛋白表达在乳腺癌中的相关性。通过GST融合蛋白沉降技术（Glutathione-S-transferase-pull down，GST-pull down）、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）和荧光共定位等分子生物学技术筛选并验证p54nrb/NONO与SREBP-1a相互结合及其位点，明确p54nrb/NONO蛋白表达变化在SREBP-1a蛋白功能变化中的作用；并分别通过体外细胞学实验和体内裸鼠成瘤实验探讨p54nrb/NONO与SREBP-1a相互作用在脂质代谢调节及乳腺癌细胞增殖等生物学功能中的作用。
　　结果：核蛋白p54nrb/NONO在乳腺癌组织中比癌旁组织高表达，并和SREBP-1a蛋白水平正相关。p54nrb/NONO和SREBP-1a存在相互作用，其中Y267是p54nrb与SREBP-1a结合的关键位点。p54nrb/NONO与核蛋白SREBP-1a结合增加了核蛋白SREBP-1a的稳定性。在乳腺癌中，p54nrb/NONO促进 SREBP-1a介导的脂质合成基因转录和脂质产物生成，促进体外乳腺癌细胞增殖和体内乳腺癌肿瘤生长。
　　结论：p54nrb/NONO与SREBP-1a结合促进了脂质合成和乳腺癌肿瘤增殖。
　　第二部分、辛伐他汀调节p54nrb/NONO表达抑制乳腺癌细胞增殖
　　目的:探讨p54nrb/NONO表达在辛伐他汀抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及其可能的作用机制。
　　方法：通过p54nrb/NONO基因的特异性小干扰RNA片段(siRNA-p54nrb)和p54nrb过表达质粒（pcDNA4/TO-p54nrb）转染技术分别建立低表达和高表达p54nrb/NONO乳腺癌MCF-7细胞株。应用细胞计数方法分别检测辛伐他汀作用后MCF-7乳腺癌细胞、低表达和高表达p54nrb/NONO MCF-7乳腺癌细胞株的增殖情况。应用实时荧光定量PCR和western blot分别检测辛伐他汀作用后MCF-7乳腺癌细胞、低表达和高表达p54nrb/NONO MCF-7乳腺癌细胞株p54nrb的mRNA和蛋白的表达水平、HMGCR的mRNA水平和利用组织总胆固醇酶法测定胆固醇含量变化。
　　结果:siRNA-p54nrb转染组MCF-7细胞中p54nrb mRNA及蛋白的表达水平显著下降（p<0.01），过表达pcDNA4/TO-p54nrb组，p54nrb mRNA及蛋白表达水平显著升高（p<0.01）。辛伐他汀（20μM）有效地抑制MCF-7细胞增殖（p<0.05）；辛伐他汀作用MCF-7细胞后，p54nrb的mRNA和蛋白表达水平明显降低（p<0.05）；转染siRNA-p54nrb下调p54nrb表达，MCF-7细胞增殖受到明显抑制(p<0.05)，过表达p54nrb蛋白促进了乳腺癌MCF-7细胞增殖(p<0.05)；MCF-7细胞中过表达 p54nrb的同时联合辛伐他汀作用48h后，辛伐他汀可取消p54nrb过表达引起的细胞增殖作用，使细胞增殖率与对照组相比，差异无统计学意义（p>0.05）；siRNA-p54nrb转染组MCF-7细胞中HMGCR的mRNA水平和胆固醇水平显著下降（p<0.01）。
　　结论：乳腺癌MCF-7细胞中，辛伐他汀通过抑制p54nrb的表达而抑制MCF-7细胞的增殖。

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缩略词

前言

1脂肪代谢和乳腺癌

2 p54nrb/NONO

3 SREBP-1

4 辛伐他汀在肿瘤中的应用

第一部分p54nrb/NONO通过SREBP-1a调节脂质代谢促进乳腺癌增殖机制的研究

1 引言

2 实验材料

3实验方法

4 实验结果

5 讨论

6 小结

第二部分 辛伐他汀调节p54nrb/NONO表达抑制乳腺癌细胞增殖

1引言

2 材料与方法

3 实验结果

4 讨论

5小结

总结

参考文献

致谢

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