三氯生对胎盘合体滋养细胞11β-HSD2影响的研究

摘要

背景：三氯生作为广谱抗菌剂被广泛用于个人护理产品。研究发现三氯生具有干扰人体内分泌代谢的作用。11β-羟类固醇脱氢酶2型（11β-HSD2）在人类胎盘组织中广泛高度表达，起着糖皮质激素屏障的作用，能够将有生物活性的糖皮质激素皮质醇代谢为无活性的皮质酮，从而保护胎儿免受过量外源性糖皮质激素的影响。
　　目的:研究三氯生对胎盘滋养细胞11β-HSD2表达的影响和对胎盘滋养细胞凋亡的影响,以及这两者之间的关系。
　　方法:采用改良的Kliman法分离提纯胎盘滋养层细胞，胎盘细胞滋养细胞在体外培养3天后达到最大合体化成为胎盘合体滋养细胞，此时加入不同浓度三氯生(0,0.001,0.01,0.1,1,10μM)孵育24h后,检测11β-HSD2的表达水平和酶活性。通过MTT、DNA ladder、Hoechst33342染色和Western blotting的方法检测胎盘合体滋养细胞经三氯生处理后细胞活力和凋亡相关指标的变化。为了研究三氯生促进胎盘滋养细胞凋亡与抑制11β-HSD2表达之间的关系，用30μM凋亡抑制剂Z-VAD-FMK预处理细胞一小时后，与0.1μM三氯生共同孵育胎盘合体滋养细胞24h，检测胎盘合体滋养细胞凋亡相关指标及11β-HSD2表达的变化。
　　结果:三氯生能够浓度依赖性地抑制胎盘合体滋养细胞11β-HSD2的mRNA、蛋白和酶的表达。同时三氯生浓度依赖性地抑制胎盘合体滋养细胞的活力。Hoechst33342荧光染色实验显示0.1μM三氯生处理组细胞核质染色明显加深，DNA ladder实验显示0.1μM三氯生处理后细胞琼脂糖电泳出现明显梯状DNA条带。三氯生还能够浓度依赖性地增加胎盘合体滋养细胞的caspase-3酶活性，并且浓度依赖性地促进促凋亡蛋白cleaved-caspase-3和Bax的表达，同时抑制抗凋亡蛋白pro-caspase-3和Bcl-2的表达。用凋亡抑制剂Z-VAD-FMK阻断三氯生对胎盘合体滋养细胞的促凋亡作用后，三氯生对胎盘合体滋养细胞11β-HSD2的表达和酶活性的抑制作用也被显著减弱。
　　结论:三氯生能够通过促进胎盘合体滋养细胞凋亡来抑制11β-HSD2的表达和酶活性，进而可能破坏胎盘糖皮质激素屏障，损害胎儿的正常发展。

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主要实验仪器

主要实验试剂与配方

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述: 11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ型在胎盘及胎儿起源成人疾病中的作用

致谢

攻读硕士期间已发表论文