低频低能量超声联合微泡对人前列腺细胞形态、弹性模量及生物学行为的影响

摘要

目的：观察低频低能量超声联合微泡作用后，人前列腺癌细胞DU145、PC-3及正常前列腺上皮细胞RWPE-1的细胞形态、细胞弹性及生物学行为的改变。
　　方法：实验分3组：对照组、单纯超声组、超声联合微泡组。每种细胞的对照组均加入一定比例的生理盐水，不进行超声辐照；单纯超声组加入等比例的生理盐水后运用超声辐照；超声联合微泡组加入等比例的微泡造影剂悬浊液，运用超声辐照。辐照的超声发射频率为21KHz，间断辐照2min，占空比30％（开3s，停7s）。各组细胞在处理过后立即用原子力显微镜观察其形貌并计算其杨氏模量；同时，对同一处理方式的对照组及超声联合微泡组细胞继续培养24h，运用CCK-8试剂盒及Transwell小室测其细胞增殖及迁移能力并用透射电镜观察细胞形态；运用western blot方法检测同一处理方式的对照组及超声联合微泡组细胞的LC3蛋白表达的变化。
　　结果：
　　1．单纯超声组的DU145细胞、PC-3细胞及RWPE-1细胞的细胞形态与对照组无明显变化；低频超声联合微泡组的三种细胞胞膜表面可见孔状结构，PC-3细胞及DU145细胞细胞膜完整性遭到破坏，与对照组相比三种细胞的弹性模量均变大，PC-3细胞尤甚。
　　2．CCK-8检测细胞增殖实验结果显示：与对照组细胞相比，PC-3细胞的超声联合微泡组细胞增殖能力减低（P=0.022），而DU145细胞及RWPE-1细胞超声联合微泡组细胞增殖能力无明显变化。运用Transwell小室的迁移实验结果显示：与对照组相比，低频超声联合微泡组的两种前列腺癌细胞DU145及PC-3的迁移能力减低（P=0.015，P=0.017）。透射电镜观察结果示：对照组的三种细胞个别细胞内可见自噬体或自噬溶酶体，而超声联合微泡组三种细胞内均见约20%细胞内出现多个自噬泡及自噬溶酶体。Western Blot检测各组细胞LC3蛋白的表达，结果显示DU145细胞、PC-3细胞、RWPE-1细胞的超声联合微泡组细胞的LC3II的量都较对照组增加(对照组 LC3II/超声联合微泡组 LC3II分别为156%，138%，244%)。
　　结论：
　　1．本研究条件下低频低能量超声联合微泡可引起前列腺癌DU145细胞、PC-3细胞及正常前列腺上皮RWPE-1细胞细胞膜出现孔状结构，破坏DU145细胞及PC-3细胞细胞膜的完整性，致细胞弹性模量增高。
　　2．本研究条件下低频低能量超声联合微泡抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖及DU145细胞的PC-3细胞的迁移。
　　3．本研究条件下的低频低能量超声联合微泡可能可以上调三种人前列腺细胞的自噬水平。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

缩略词表

绪论

参考文献

第一部分 原子力显微镜观察低频低能量超声联合微泡作用后的人前列腺癌及正常细胞形貌及弹性模量变化

1 材料与方法

2. 结果

3. 讨论

4. 结论

参考文献

第二部分 低频低能量超声联合微泡作用后人前列腺癌及正常细胞的生物学行为变化

1. 材料与方法

2. 结果

3. 讨论

4. 结论

参考文献

全文总结及展望

全文总结

创新性

不足

展望

致谢

攻读硕士期间已发表或录用的论文及参与的课题