GM-CSF诱导成纤维细胞MMP-2和MMP-9的表达及机制研究

摘要

研究目的：
　　探讨单核巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对人皮肤成纤维细胞MMP-2、MMP-9表达的影响以及其分子生物学机制。
　　研究方法：
　　1）ELISA、明胶酶谱及Western Blot检测不同GM-CSF浓度（0、10、50、100、500ng/ml）刺激下MMP-2和MMP-9在成纤维细胞中的表达情况；
　　2）免疫荧光及Western Blot检测GM-CSF及SP600125（JNK抑制剂）对成纤维细胞内JNK/c-Jun磷酸化水平的影响，RT-PCR分别检测GM-CSF或SP600125+GM-CSF对成纤维细胞内MMP-2/-9 mRNA合成的影响，ELISA分别检测GM-CSF或SP600125+GM-CSF处理成纤维细胞后（6、12、24、48h）MMP-2/-9的浓度；
　　3）cck-8试剂盒检测GM-CSF对成纤维细胞增殖的影响，细胞划痕实验检测GM-CSF对成纤维细胞迁移能力的影响。
　　研究结果：
　　1）GM-CSF处理后，人皮肤成纤维细胞MMP-2/-9的表达均明显高于对照组（P<0.05），MMP-2/-9的表达量及活性与GM-CSF浓度呈正相关；
　　2）GM-CSF处理后，成纤维细胞内JNK/c-Jun的磷酸化水平明显高于对照组（P<0.05）；MMP-2/-9的mRNA转录水平显著高于对照组（P<0.05）；SP600125预处理后，与GM-CSF组相比，c-Jun的磷酸化明显被抑制（P<0.05），MMP-2/-9的mRNA水平则显著降低（P<0.05）；GM-CSF处理细胞后，上清中MMP-2/-9的浓度在24小时达到最高值，24-48小时逐渐降低，但均显著高于对照组（P<0.05）；在SP600125+GM-CSF组，MMP-2的表达低于对照组，而MMP-9的表达明显高于对照组（P<0.05）；
　　3）GM-CSF对成纤维细胞的增殖无明显影响（P>0.05）；GM-CSF能够促进成纤维细胞的迁移（P<0.05），而SP600125则能抑制成纤维细胞的迁移（P<0.05）；
　　结论: GM-CSF通过活化JNK/c-Jun信号通路上调成纤维细胞MMP-2和MMP-9的合成、表达与分泌，并促进成纤维细胞的迁移。

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绪论

第一章 GM-CSF诱导人皮肤成纤维细胞MMP-2/MMP-9的表达

材料和方法

结果

讨论

第二章 JNK/c-Jun信号通路调控GM-CSF诱导成纤维细胞MMP-2/MMP-9的表达

材料和方法

结果

讨论

第三章 GM-CSF对成纤维细胞增殖、迁移的影响

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

附录 综述:MMP-9介导创面愈合中血管新生的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表学术论文