S1P受体在HA调控淋巴管屏障功能及淋巴管新生中的机制研究

摘要

目的：探讨高/低分子量透明质酸（High/Low molecular weight hyaluronan，HMW-HA/LMW-HA）对淋巴管屏障功能及淋巴管新生的影响及机制研究；研究鞘氨醇-1-磷酸盐（Sphingosine-1-phosphate，S1P）受体在不同分子量HA调控淋巴管屏障功能及淋巴管新生中的作用。
　　方法：1、采用荧光素钠渗透实验与免疫荧光实验分别检测HMW-HA、LMW-HA对单层淋巴内皮细胞（lymphatic endothelial cell，LEC）渗透性和细胞间紧密连接的影响。2、利用MTT、Transwell、Matrigel管腔形成实验等研究HMW-HA、LMW-HA对淋巴管新生的作用。3、通过免疫荧光及免疫共沉淀观察S1P受体，淋巴管内皮细胞透明质酸受体（Lymphatic vessel endothelial hyaluronan rceptor，LYVE-1）分布及相互结合。4、运用siRNA沉默S1P受体，分别探讨其在HMW-HA、LMW-HA诱导淋巴管屏障功能改变及淋巴管新生中的作用。
　　结果：1、LMW-HA增强单层LEC渗透性，破坏细胞间紧密连接，促进应力纤维形成；相反，HMW-HA保护LEC细胞间连接的完整性。2、LMW-HA通过活化下游Src/ERK1/2信号通路促LEC增殖、迁移、管腔形成，而同等浓度下HMW-HA对淋巴管新生无影响。3、LMW-HA/HMW-HA分别增加S1P3受体、S1P1受体蛋白表达水平，siRNA下调S1P1受体可阻断HMW-HA对LEC细胞间连接的保护，同时下调S1P3受体可抑制LMW-HA破坏细胞间连接完整性。4、LYVE-1与S1P3受体是一对“拍档”，LMW-HA促进S1P3受体与LYVE-1相互结合，利用siRNA分别下调S1P3或LYVE-1受体表达后，LMW-HA介导的淋巴管新生受到显著抑制。
　　结论：LMW-HA能够结合其受体LYVE-1并通过S1P3受体破坏淋巴管屏障，从而促进淋巴管新生；HMW-HA结合LYVE-1后可通过S1P1受体保护淋巴管屏障功能。

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缩 写 词 表

绪论

参 考 文 献

第一部分 S1P受体在LMW-HA/HMW-HA调控淋巴管屏障功能中的作用

引言

材料与方法

结果

讨论

参 考 文 献

第二部分 S1P受体在LMW-HA/HMW-HA调控淋巴管新生中的作用研究

引言

材料与方法

结果

讨论

参 考 文 献

全 文 小 结

攻读硕士学位期间发表的论文

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