乙酰化酶基因hMOF与HBV复制相关性的研究

摘要

目的：
　　HBV的复制与宿主细胞内表观遗传学因子的相关性成为新进关注的热点。本课题探讨乙酰化酶基因hMOF与慢性乙型肝炎病毒感染后HBV复制的相关性。
　　方法：
　　1.构建乙酰化酶基因hMOF慢病毒RNAi文库，选择8对可以保证干扰效率的shRNA序列，构建慢病毒载体；
　　2. shRNA慢病毒感染HepG2.2.15细胞，感染后72 h后，qPCR检测HBV pgRNA，确保干扰效率；
　　3.沉默hMOF72 h及96 h后，ELISA检测细胞上清分泌的HBsAg与HBeAg含量，qPCR检测HBV-DNA的含量；
　　4.免疫组化方法分别检测HBeAg阳性与HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中hMOF的蛋白水平表达，qPCR方法检测hMOF mRNA水平，分析其与患者血清HBsAg、HBeAg、HBV-DNA的相关性。
　　结果：
　　1.成功构建了8个hMOF基因的慢病毒载体；
　　2.沉默hMOF基因后，HBsAg、HBeAg、HBV-DNA的表达水平显著下调；
　　3. HBeAg阳性慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中hMOF的蛋白及mRNA表达水平明显高于正常对照组（P＜0.001、P=0.004），且hMOF的蛋白水平与HBsAg、HBeAg、HBV-DNA均成正相关（r2=0.3275、P＜0.001，r2=0.22、P=0.0051，r2=0.4195、P＜0.001）； HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中hMOF的蛋白表达水平明显高于正常对照组（P=0.0083），且 hMOF的蛋白水平与HBV-DNA成正相关（r2=0.1896、P=0.0377）。
　　结论：
　　沉默hMOF基因后，HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达显著下调；慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中hMOF的蛋白表达水平与HBV-DNA成正相关；HBeAg阳性患者肝组织中hMOF的mRNA及蛋白表达水平与HBsAg、HBeAg成正相关，提示hMOF可能在HBV复制的过程中发挥重要作用。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

英文缩写索引

绪论

第一部分乙酰化酶基因hMOF RNA干扰文库的构建及其对HepG2.2.15细胞感染影响的研究

前言

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

1.组蛋白乙酰化酶hMOF基因shRNA慢病毒载体的构建

讨论

第二部分乙酰化酶基因hMOF与HBV复制相关性的研究

前言

材料与方法

1．材料

2. 实验方法

结果

1.入组患者的临床资料

2．免疫组化法检测肝组织中hMOF的蛋白表达情况

3．Western Blot法检测肝组织中hMOF的蛋白表达情况

4. qPCR法检测肝组织中hMOF的mRNA表达情况

讨论

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间取得的学术成果