红霉素对高氧暴露早产鼠肺组织肿瘤坏死因子-α和GSH表达的影响

摘要

目的：
　　观察大环内酯类抗生素红霉素对高氧暴露下早产新生大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-а，TNF-α）、白介素-8（interleukin-8，IL-8）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamyl cysteine synthetase，γ-GCS）和谷胱甘肽（glutathione hormoneGSH）表达的影响，从而探讨红霉素对高氧肺损伤的干预作用。
　　方法：
　　（1）实验动物模型制备：由上海交通大学医学院实验动物科学部提供成年SD（Sprague-Dawley，SD）大鼠，其体重：180-220g，雌鼠与雄鼠按3：1合笼，第二天早晨取雌鼠阴道分泌物涂片，镜检见精子，则记为妊娠第一天。孕鼠分笼并于孕21d（足月为22d）时行剖宫产取出早产鼠。复苏存活的早产鼠转移给近日已自然分娩的母鼠，作其代母鼠。新生早产鼠适应性生长1d，存活者随机分配，每只代母鼠带8～10只早产鼠，代母鼠每24h在高氧组和空气组之间更换一次，以避免氧中毒并排除不同组间代母鼠的影响。高氧暴露在自制氧箱(90 cm×60 cm×50 cm)内完成，氧流量2～3 L/min，用CYS-1数字式测氧仪连续监测氧浓度，使之维持在>85％。室温保持在25～26℃，每12h交替，每天开箱15min清扫，并每日更换无水氯化钙和氧化钙吸收水和二氧化碳，保持湿度60%～70%，二氧化碳浓度<0.5%。空气组置于同一室内空气中。
　　（2）实验分组：生后1d的早产新生SD（Sprague Dawley，SD）共96只大鼠完全随机分为四组：空气暴露+生理盐水组、空气暴露+红霉素组、高氧暴露+生理盐水组、高氧暴露+红霉素组，每组8只。空气暴露组置于同一室常压空气中；高氧暴露组持续暴露于常压自制氧箱中。四组早产鼠分别于空气或高浓度氧暴露后1d、7d、14 d时，用10%乌拉坦（1ml/100g）腹腔注射麻醉后每组处死早产鼠8只。操作台上固定早产鼠剖开胸腔，随后气管插管,经导管缓缓注入4%多聚甲醛至肺尖膨胀，甲醛固定15min后，结扎左支气管，取右肺浸泡于4%多聚甲醛中，24h内石蜡包埋，5μm连续切片以备用。
　　（3）实验方法：提取的各组早产鼠肺组织标本采用石蜡包埋切片行苏木精—伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE）观察肺组织的病理学变化。采取双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA法）分析肺组织匀浆检测TNF-α、IL-8和GSH的蛋白水平。采取半定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）测定γ-GCS mRNA水平的动态表达。
　　结果：
　　（1）随着高氧暴露时间延长，高氧组早产鼠与空气组同日龄的早产鼠相比较，体重显著减轻，皮肤灰暗、皱纹多，生活活力下降，呈现典型生长发育不良表现；与空气对照组比较，高氧组肺组织有明显水肿、出血和肺发育滞后的损伤改变。
　　（2）与空气组相比较，高氧暴露1d、7d高氧组早产鼠肺组织的TNF-α和IL-8表达显著增强，尤其TNF-α表达增强出现更早，14 d明显减弱（P<0.05）。
　　（3）与生理盐水组相比较，红霉素干预后1d、7d、14 d红霉素组早产鼠肺组织中的TNF-α和IL-8表达水平显著降低（P<0.05），但相对1d、7 d时14d降低程度轻。
　　（4）与空气暴露+生理盐水组比较，红霉素干预后1d、7d、14d红霉素组早产鼠肺组织中GSH表达均增强，与高氧暴露+生理盐水组比较，红霉素干预后1d、7d、14d红霉素组早产鼠肺组织中GSH表达显著增强（P<0.05）。高氧组大鼠肺组织GSH表达在各时间点之间的差异有统计学意义（P<0.01），随时间推移7d达高峰，14d回落。
　　（5）与空气暴露+生理盐水组相比，高氧暴露+生理盐水组1d、7d早产鼠肺组织中γ-GCS mRNA表达均显著增强（P<0.05），但14d无明显改变（P>0.05）。与高氧暴露+生理盐水组相比，高氧暴露+红霉素组红霉素干预7d、14d能明显抑制高氧暴露对肺组织中γ-GCS mRNA表达的上调作用（P<0.05），且γ-GCS mRNA14d时表达仍显著增强（P<0.05）。
　　结论：
　　高氧暴露发诱导的炎症介质TNF-α和IL-8释放参与高氧肺损伤的发生发展过程，红霉素可能通过抑制炎症介质TNF-α和IL-8释放，上调γ-GCS活性，提高GSH抗氧化，从而降低高氧肺损伤。

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材料及方法

一．实验材料

二．实验方法

三． 统计学处理

结果

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结论

参考文献

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