DDH患者关节内软骨基质成分Col-Ⅱ和Aggrecan的表达及意义

摘要

目的：
　　髋关节发育不良(Developmental dysplasia of the hip,DDH)是一种由于髋关节发育障碍所引起的疾病，其主要临床表现为患侧髋关节长期慢性的疼痛及髋关节活动受限。本研究旨在评价DDH患者关节软骨基质成分Col-II和Aggrecan的表达情况，并以此探究DDH患者关节软骨代谢异常或关节软骨退变与其病程发展的关系。
　　方法：
　　分别从获取Crowe I型及II型的DDH患者，骨关节炎（Osteoarthritis,OA）患者和股骨颈骨折患者的髋关节软骨。采用蕃红O–固绿染色、甲苯胺蓝染色和HE染色的方法来评估关节软骨内蛋白聚糖的水平。II型胶原（Collagen-II,Col-II）、X型胶原（Collagen-X,Col-X）和金属基质蛋白酶-13（Matrix meta llopro te ina ses-13,MMP-13）的水平由免疫组织化学染色（Immunohistochemistry,IHC）和Western Blot的实验方法来评估。采用透射电镜扫描（Transmission electron microscopy,TEM）的方法对关节软骨进行微观形态的评价。实时定量PCR（Quantitative real-time PCR,qRT-PCR）方法则被用来检测关节软骨中蛋白聚糖、Col-II、Col-X和MMP-13的mRNA水平。
　　结果：
　　蕃红O–固绿染色和甲苯胺蓝染色的结果显示，与OA患者组和对照组相比，DDH患者组关节软骨基质内蛋白聚糖的水平有明显的降低。I HC和Western Blot的结果显示，与OA患者组相比，DDH患者组关节软骨内Col-II的表达减少而MMP-13的表达增加。透射电镜扫描可以清晰地观察到DDH患者关节软骨中的胶原纤维数量稀疏且排列杂乱不整。与OA患者组相比，DDH患者组关节软骨内Col-II和蛋白聚糖的mRNA表达水平显著降低，而Col-X的mRNA表达水平则显著升高。
　　结论：
　　早期DDH患者（Crowe I型及II型）的关节软骨内软骨基质成分Co l-II及Aggrecan表达下降，并且表达量低于OA患者。同时DDH患者关节软骨内软骨退变指标MMP-13及Col-X表达上升，提示早期DDH患者在软骨代谢层面上即存在严重的关节退变。此观察结果为我们在研究DD H患者关节软骨代谢调节的方面提供了一种新的视野。

目录

英文缩略词表

绪论

1.材料及方法

1.1入选患者介绍

1.1.1入组标准（附Crowe分型标准及K-L分级标准）

1.1.2排除标准

1.1.3各组患者基本情况

1.2伦理学声明

1.3主要实验及试剂

1.3.1主要试剂及仪器

1.3.2组织化学染色及IHC检测软骨组织中软骨基质成分指标的表达水平

1.3.3透射电镜实验观察软骨及软骨下骨超微形态及结构

1.3.4 Western Blot法测定软骨组织中软骨基质成分及关节退变指标的表达水平

1.3.5 实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测软骨组织中软骨基质成分及关节退变指标在转录水平上的表达水平

1.3.6统计学分析

2. 结果和分析

2.1 DDH组患者关节软骨机制内蛋白聚糖和Col-II的含量减少

2.2 关节软骨基质的超微形态结构分析

2.3 DDH组患者关节软骨基质中Col-II的蛋白表达减少

2.4 DDH 组患者关节软骨基质中 Col-II 的 mRNA 表达减少而MMP-13、Col-X的mRNA表达上升

3. 讨论

4. 结论

参考文献

致谢

攻读博士学位期间（待）发表学术论文成果

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