基因工程抗HER2/neu ×抗CD16双特异性抗体的构建、表达及其功能的初步研究

摘要

双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)是增强以抗体为基础的肿瘤免疫治疗效果的发展方向之一.BsAb含有两种特异性抗原结合位点,能在肿瘤细胞和免疫效应细胞之间架起桥梁,触发细胞毒反应,产生导向性的杀伤肿瘤效应功能.该研究采用基因工程方法构建了抗HER2/neu×抗CD16 BsAb,并对其抗原结合特性及杀伤HER2/neu过表达肿瘤细胞功能进行了初步研究.该研究分四个部分.1、抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆、表达及免疫学特性分析.采用5'-RACE(rapid amplification of cDNA end,RACE)克隆策略,从分泌抗人CD16单抗的杂交瘤细胞B88-9获得了抗人CD16单抗的重、轻链可变区(VH、VL)及前导肽序列.采用重叠延伸拼接法,通过PCR将VH、VL和Linker Peptide(连接肽)序列在基因水平上拼接,直接合成scFv基因;scFv与人IgG1 Fc区基因片段插入载体pCI-neo构建了scFv-Fc融合蛋白表达载体并在CHO细胞中进行了表达.通过G418筛选获得稳定高表达克隆.2、抗人HER2/neu scFv-Fc融合蛋白的表达及免疫学特性分析.为检测抗人HER2/neu单抗VH、VL融合构建的scFv的免疫学特性,将scFv基因与人IgG1 Fc区基因片段插入载体pCI-neo构建了scFv-Fc融合蛋白表达载体并在CHO细胞中进行了表达.通过G418筛选获得稳定高表达克隆.更换无血清培养基培养,经重组蛋白A亲和层析柱纯化scFv-Fc融合蛋白.3、

目录

前言

第一部分 抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆、表达及免疫学初步特性分析

1材料和方法

2结果

3讨论

第二部分 抗人HER2/neu scFv-Fc融合蛋白的表达及免疫学特性分析

1材料和方法

2结果

3讨论

第三部分“杵臼结构”修饰CH3结构域构建抗HER2/neu×抗CD16双特异性抗体

1材料和方法

2结果

3讨论

第四部分三价双特异性抗体的设计及构建

1材料和方法

2结果

3讨论

结论

参考文献

文献综述 双特异性抗体研究进展

致谢

附录Ⅰ缩写词表

附录Ⅱ攻读博士学位期间发表文章