鲮微卫星分子标记的筛选及遗传多样性分析

摘要

鲮(Cirrhinus molitorella)属鲤形目、鲤科、野鲮亚科、鲮属。俗称土鲮、雪鲮、花鲮,主要分布在华南地区,国外见于东南亚。鲮在珠江三角洲流域与草、鲢、鳙合称四大家鱼,因饲源广、抗病力强、群体产量高且能够适应较肥水体,成为华南地区池塘的主养品种。
　　目前由于水体环境污染的日益严重及不规范的养殖操作,不可避免的造成了其遗传多样性的降低,导致其对环境变化承受能力的下降和生长速度减缓等现象的出现。因此,利用分子遗传标记对鲮进行遗传多样性分析并寻求适宜的保护措施,对其种质资源的保护和可持续发展的延续是十分必要的。
　　本文用取自同一批已建立的生长较快西江鲮野生浅色群体的大、小个体组各31尾个体的基因组 DNA,分别进行了微卫星分子标记开发与筛选对比实验和鲮遗传多样性分析两部分实验,旨在开发出对鲮适用性强的特异性微卫星DNA分子标记;并通过对其遗传多样性进行分析,开展进一步选育工作,找到对鲮及其他鱼类进行遗传多样性研究、群体遗传结构分析、种群亲缘关系鉴定及种质资源保护等方面的研究方法。以下是实验主要内容:
　　1.鲮微卫星分子标记开发与筛选对比实验
　　通过磁珠富集法得到微卫星引物23对,其中15对可稳定扩增,引物获得的效率为65.22％,多态性引物14对,所占比例为60.87%;通过近缘鱼类引物筛选法筛选微卫星引物33对,其中10对可稳定扩增,引物获得的效率为30.30%,多态性引物8对,所占比例为24.24%,两方法的平均多态信息含量分别为0.5933和0.5692。两者所得引物的多态性均较丰富,但就微卫星引物的获得效率来说,前者是后者的2.15倍,磁珠富集法优于近缘鱼类引物筛选的方法。
　　2.鲮遗传多样性分析
　　本文两种方法共得到能够稳定扩增的微卫星引物25对,其中单态位点引物3对,中度多态位点引物有7对,高度多态位点引物15对,各多态性位点的PIC值从0.2885到0.8457,平均多态信息含量为0.5846。大、小个体组各多态性位点 PIC值范围分别为0.2885~0.8050和0.2885~0.8256,其 PIC平均值分别为0.5615和0.5846,两个体组的多态性信息含量相近且均大于0.5,多态信息含量丰富。说明我们可对实验所取已选育过的西江鲮野生浅色群体进行再次选育,选择出生长速度快、品质优的鲮品种;高度多态性引物4的b位点,片段大小为119 bp,在大个体组中的出现频率高于小个体组近3倍,初步可作为候选差异性标记,用于分离生长差异性群体。

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引 言

1 鲮及其养殖现状说明

2 遗传标记的发展与鲮遗传多样性分析

3 DNA 分子标记在鲮遗传育种中的应用

4 微卫星引物获得的方法

5 实验目的、意义及路线

第一章 鲮微卫星分子标记开发与筛选对比实验

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果

2.1 磁珠富集法引物筛选结果

2.2 近缘鱼类引物筛选扩增结果

2.3 两种引物筛选效率的比较

3 讨论

第二章 鲮遗传多样性分析

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果

2.1 微卫星引物筛选

2.2 微卫星引物扩增结果

2.3 高态位点基因频率分析

3 讨论

3.1 鲮遗传多样性分析

3.2 高态位点基因频率分析

全文总结

参考文献

附录 1 常用试剂与缓冲液的配制

附录 2 中英方对照缩略词表(Abbreviations)

附录 3 攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢