尼罗罗非鱼耐盐碱选育一代耐受性、生长性能及鳃Na+/HCO3-共转运子、碳酸酐酶基因表达

摘要

尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）为广盐性鱼类，经驯化后可以在一定范围的盐碱水中生存生长，是开展耐盐碱性能选育的重要候选种类。本论文以尼罗罗非鱼耐盐碱选育一代为材料，评估了幼苗急性盐碱耐受性能，慢性盐碱耐受性能及盐碱水中生长性能；利用 PCR扩增技术获得了尼罗罗非鱼Na+/HCO3-共转运子（NBCe1）基因cDNA部分序列，比较了单盐（10、15）、单碱（1.5、3g/L NaHCO3）、盐碱混合（盐度10，碱度1.5g/L；盐度15，碱度3g/L）胁迫后不同时间（0、6、12、24、48、72、96h）血清渗透压、离子浓度（Na+、K+、Cl-、Ca2+）以及鳃碳酸酐酶（CA）活性、CA与NBCe1 mRNA表达变化，主要结果如下：
　　（1）以上海、河北、山东品系尼罗罗非鱼基础群体（F0代）和经盐碱驯化选育一代（F1代）幼鱼为试验材料，比较它们在不同盐度组（10g/L、15g/L、20g/L、25g/L）中的半致死盐度，碳酸氢钠（NaHCO3）碱度组（2g/L、4g/L、6g/L、8g/L、10g/L、12g/L）中的半致死碱度，以及盐碱混合组（盐度10g/L、15g/L、20g/L，碱度2g/L、4 g/L、6g/L）中的半致死盐碱度。试验结果表明，尼罗罗非鱼F1代幼鱼96h的半致死盐度为21.625-21.820，半致死碱度为7.903-8.407，半致死盐碱度：10g/L盐度下，碱度为5.577-6.096；15g/L盐度下，碱度为3.940-4.794，F1代幼鱼96h半致死盐碱度均显著高于F0代幼鱼（P<0.05）。选育一代中，河北品系幼鱼盐碱耐受能力显著大于上海和山东品系（P<0.05）。研究结果为尼罗罗非鱼盐碱驯化选育研究提供了基础资料。
　　（2）以尼罗罗非鱼耐盐碱选育一代为材料，开展了幼鱼慢性致死实验和鱼种不同盐碱环境（S0A0、S10A0、S10A2、S10A4、S10A6）中生长试验，评估选育一代的盐、碱耐受性能和生长性能。慢性致死实验结果表明，选育一代山东、上海、河北品系的半致死盐度分别为3.95±1.29、53.36±1.53、56.25±2.12g/L，半致死碱度分别为19.18±1.24、8.73±1.20、20.05±1.37g/L。生长实验表明，随着盐碱浓度的增加，选育一代的日增重率表现为下降趋势。S0A0组显著大于其他各组（P<0.05），S10A0、S10A2组间无显著差异（P>0.05），但显著大于10A4、S10A6组（P<0.05）；除S10A6组中山东品系日增重率大于上海、河北品系（P<0.05）外，各盐碱组中三个品系间无显著差异。本实验结果为尼罗罗非鱼耐盐碱选育工作积累了基础资料。
　　（3）为了理解盐碱条件下鱼类渗透调节机制，以尼罗罗非鱼为实验材料，PCR扩增得到了Na+/HCO3-共转运子（NBCe1）基因cDNA部分序列，比较了单盐（10、15）、单碱（1.5、3g/L NaHCO3）、盐碱混合（盐度10，碱度1.5g/L、盐度15，碱度3g/L）胁迫后不同时间（0、6、12、24、48、72、96h）血清渗透压、离子浓度（Na+、K+、Cl-、Ca2+）以及鳃碳酸酐酶（CA）活性、CA与NBCe1基因mRNA表达变化。结果显示，血清渗透压、离子浓度、鳃组织CA酶活、CA与NBCe1基因mRNA表达变化均与胁迫强度呈正相关。随时间推移，血清渗透压、离子浓度呈现先上升后下降的变化趋势，单盐、盐碱混合组血清渗透压较单碱组高。单碱组和盐碱混合组中鳃CA活性较单盐组高，低盐碱胁迫（盐度10，碱度1.5g/L）下CA活性较晚达最高。单盐、单碱、盐碱混合组中，NBCe1基因mRNA在鳃中均略微上调，但不显著（P>0.05）；CA基因mRNA表达均上调，单碱、盐碱混合组上调显著(P<0.05)，显示出 NBCe1与CA均参与转运 HCO3-，以维持碱性环境中尼罗罗非鱼体内渗透压平衡。研究结果为尼罗罗非鱼盐碱适应生理调节提供了基础资料。

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第一章 引 言

1.1 立题依据

1.2 国内外研究进展

1.3 课题来源

1.4 研究内容及意义

第二章 尼罗罗非鱼基础群体与选育一代幼鱼盐碱度耐受性比较

2.1 前言

2.2 材料和方法

2.3 结果

2.4 讨论

第三章 尼罗罗非鱼选育一代耐盐碱和生长性能评估

3.1 前言

3.2 材料与方法

3.3 结果

3.4 讨论

第四章 盐、碱胁迫对尼罗罗非鱼鳃Na+/HCO3-共转运子、碳酸酐酶(CA)基因表达影响

4.1 前言

4.2 材料和方法

4.3 结果

4.4 讨论

小结

参考文献

硕士期间发表论文

致谢