喹烯酮在刺参(Apostichopus japonicus)幼参养殖中的安全性研究

摘要

刺参（Apostichopus japonicus），又称仿刺参，属于棘皮动物门(Echinodermata)，海参纲(Holothuroidea)，具有很高的营养价值和药用价值。随着刺参需求量的不断扩大，我国的刺参养殖业也迅速发展起来。但在养殖过程中，刺参病害、死亡现象频频发生，合理用药显得尤为重要。喹烯酮(quinocetone)是我国首创的、拥有自主知识产权的一类新型喹噁啉类兽药，2003年农业部批准其作为抗菌促生长剂应用在猪饲料中。喹烯酮对动物具有明显的抗菌促生长作用，且具有在动物体内代谢快、残留少、不蓄积等优点，突破了传统兽药的局限性。目前，喹烯酮广泛地应用在鸡、鸭、猪等畜禽中，在鱼类中也有应用研究报道，但在海参中至今未见相关报道。
　　本文通过研究在刺参保苗期间，喹烯酮对幼参的生长、非特异性免疫及抗应激能力的影响，探讨了喹烯酮在刺参幼参保苗期间的使用安全性。证实了喹烯酮能导致刺参体内3-甲基-喹噁啉-2-羧酸（MQCA）残留，并通过研究在刺参保苗期间和养成期间，喹烯酮及MQCA在刺参体内的分布和消除规律，探讨了喹烯酮对养成刺参食品安全性的影响。
　　实验结果表明，喹烯酮对刺参有明显的促生长作用，各实验组刺参幼参的增重率、特定生长率和成活率均高于对照组。随着喹烯酮浓度的增加，增重率、特定生长率和成活率都呈现出先升高后下降的趋势，20 mg/kg组最高。在饲料中添加适量喹烯酮可以影响刺参幼参的免疫指标，随着喹烯酮浓度的增加，ACP、AKP和SOD三种酶活性呈现出先增加后降低的趋势，存在剂量效应，20 mg/kg组的三种酶活性最高；随着时间的延长，实验组三种酶活性与对照组的差异减小，50天后SOD、ACP活性接近对照组水平。实验表明，高浓度的喹烯酮对幼参可能产生一定毒性，且使其抗应激能力变差。由实验结果可以看出，在刺参保苗期间喹烯酮的最适添加量为20 mg/kg。
　　本实验优化了高效液相色谱法测定刺参中喹烯酮残留量的方法。样品经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂净化，色谱柱为MG C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈+水（45+55，V/V），在312 nm波长下进行检测。结果表明，在0.05μg/mL~1.00μg/mL范围内喹烯酮的响应值与浓度呈现良好的线性关系，线性回归方程为Y=5.41e+002 X+1.24e+002，相关系数为R2=0.9995。在添加浓度为20~100μg/kg时，平均回收率在75.9~86.2％之间，相对标准偏差在3.15~6.48%之间。该方法简便快捷，灵敏度高，重复性好，精密度和准确度均达到残留分析的要求。
　　本实验研究了喹烯酮在刺参幼参体内的残留消除规律，用药一天后，刺参幼参体内喹烯酮的残留量迅速达到较高浓度，表明喹烯酮在刺参体内吸收快；随着时间延长，各浓度组刺参体内喹烯酮的残留量在一定范围内小幅度波动，且残留量与用药浓度大致成正比关系。停药两天后，除100 mg/kg组外，其他组喹烯酮残留量均低于检出限；停药4天后，100 mg/kg组刺参体内喹烯酮残留量也低于检出限，表明停药后喹烯酮原药在刺参幼参体内消除较快，对养成刺参食品安全性无影响。
　　实验首次证实了喹烯酮能导致刺参体内MQCA的残留，且存在蓄积现象。各组刺参幼参体内的MQCA残留量与用药浓度近乎成正比例关系。停药后MQCA残留消除缓慢，停药46天后，刺参体内MQCA残留量仅略有下降；停药246天尚没有完全消除；停药403天后完全消除。因此，保苗期间合理使用喹烯酮，养成期间不再使用，经1年以上的养成期以后，MQCA是可以完全消除的，对成品刺参的食品安全性没有影响。
　　本实验发现喹烯酮在刺参内脏中的含量明显高于体壁中，其代谢物MQCA在刺参组织中蓄积，体壁中残留量高于内脏中。

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引言

第一章 综述喹烯酮在水产养殖中的有效性及安全性研究进展

1.喹烯酮的理化性质及其作用机理

2. 喹烯酮对水产动物生长性能的影响

3. 喹烯酮的毒理学研究

4. 喹烯酮的检测方法

5. 喹烯酮在水产动物中的药代动力学

6. 展望

第二章 喹烯酮对刺参幼参使用安全性研究

一、喹烯酮对刺参幼参生长、非特异性免疫及抗应激能力的影响

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

二、喹烯酮对刺参幼参生长、抗应激能力影响的验证实验

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

第三章 喹烯酮对刺参食品安全性影响的研究

一、喹烯酮在刺参幼参体内的残留消除研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

二、喹烯酮代谢物在刺参幼参体内的残留消除研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

三、喹烯酮及其代谢物MQCA在刺参幼参体内的分布

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

第四章 总结

一、喹烯酮对刺参使用安全性研究

二、喹烯酮对刺参食品安全性影响研究

参考文献

硕士期间撰写发表论文情况

致谢