关于大黄素降低腹腔感染大鼠血浆内毒素水平及保护肠粘膜的研究

摘要

目的:腹腔感染对于外科学来说是一种常见疾病，而严重的腹腔感染会导致全身炎症反应综合症(SIRS)以及多器官功能障碍综合症(MODS)。SIRS是致命的、破坏性的，本质为炎症介质介导的持续的过度的炎症反应，在SIRS、MODS两者的发展过程中，肠道内的细菌或者内毒素的移位对于SIRS及MODS的发展有着重要的影响。肠道的处理对于治疗这两种疾病来说也至关重要。中药大黄素能够通过将肠内堆积毒素的排出，有效的促进肠功能的恢复，也有大量的研究表明大黄素能够对肠粘膜具有保护的作用。但大黄素对于血浆内毒素水平的影响未见报道，本实验着重研究大黄素对于血浆内毒素水平的影响。
　　 方法:将45只SD大鼠随机分为三组(A、B和C组)，每组15只。A组为假手术组，将大鼠麻醉后，暴露盲肠约1分钟后关腹，不做特殊处理；B组为盲肠结扎穿刺(CLP)后大黄素治疗组，将大鼠麻醉暴露盲肠后，用丝线结扎三分之一处盲肠，以18号针头穿刺盲肠并抽取肠内容物少许注入腹腔，以造成腹腔感染，然后复位盲肠，常规关腹，术中应该注意避免肠梗阻。该组造模后即刻给予大黄素10mg/kg稀释为2ml注射，其后每12h重复一次，C组为盲肠结扎穿刺(CLP)对照组，造模方式同B组，但造模后仅仅给予注射生理盐水水2ml注射，然后也12h小时重复给予生理盐水2ml。
　　 术后12小时、24小时、36小时(每时点5只)，常规麻醉开腹，吸取显色基质法鲎试剂盒中配套的血液抗凝剂1 ml于无热原试管中，用无热原注射器准确抽取血1 ml注入试管中，和抗凝剂混匀，置于冰水中，加盖，迅速低温离心10 min(1000转/min)，吸出上清液(富含血小板血浆或血清)，制成二倍稀释液备用，-30℃保存。并取大鼠的空肠段约2cm，所取的空肠组织以10％甲醛固定液固定。苏木素、伊红染色后普通光学显微镜观察切片。
　　 结果：
　　 1、一般情况：45只实验大鼠造模后均能较好存活。假手术组(A组)大鼠精神较好，正常进食及活动，大小便正常。盲肠结扎穿刺组后大鼠的精神萎靡不振，活动及进食均有明显的减少，随着时间的推移上述的状况有加重趋势，伤口无渗血。大黄素治疗组(B组)大鼠对外界刺激较敏感，大便为软便或稀便。而CLP对照组(C组)大鼠对外界刺激不敏感，大便少、有的有腹泻。
　　 2、内毒素的变化：CLP后的内毒素水平高于正常值(P＜0.01)。12小时、24小时、36小时B组内毒素均明显低于C组(P＜0.05)。
　　 3、大体标本观察：在各时点处死动物后，A组见腹腔内基本正常：B组及C组可见腹腔内有脓性或血性渗出液，并带有恶臭味，肠管有较明显的胀气现象，内脏可见有充血水肿。
　　 4、病理学观察：A组各时点肠粘膜正常或有轻度充血水肿(0-1级)。结扎穿刺大鼠12小时后光镜下见B组可见肠粘膜轻度水肿，上皮下血管轻度充血(1级)，C肠见较明显的上皮下间隙扩大，肠上皮与固有层分离现象较少(2级)；24小时后B组可见有明显的肠上皮下间隙扩大，肠上皮与固有层分离分离现象明显(2级)，C组还可见肠粘膜上皮剥脱现象，还可见部分的绒毛尖端剥落现象(3级)；36小时后B组的肠粘膜上皮与固有层分离，有部分上皮剥脱现象(2-3级)，C组的小肠绒毛剥落，固有层及扩张血管显露(4级)。
　　 结论:
　　 对于腹腔感染所致脓毒症大鼠模型，大黄素能有效降低大鼠CLP后血浆内毒素水平，减轻大鼠CLP后肠粘膜损伤程度，其作用可能通过阻断肠粘膜屏障损伤机制来实现。