珠子参化学成分及体外抗肿瘤活性研究

摘要

珠子参为五加科植物珠子参(Panax japonicus C.A.Mey.Var.major(Burk) C.Y.WU et K.M.Feng或羽叶三七 Panax japonicus C.A.Mey.Var.bipinnatifidus(Seem)C.Y.Wu et K.M.Feng)的干燥根茎。主要产于我国西南及陕西、甘肃、安徽、浙江、江西、福建、河南、湖南、湖北、广西、西藏等地。具有补肺、养阴、活络、止血的功效。本论文在实验室前人对珠子参化学成分研究的基础上，利用现代分离色谱手段，从珠子参60％乙醇提取物中分离得到12个化合物，通过理化常数测定、薄层色谱检测和各种波谱学特征(1H-NMR、13C-NMR)分析，鉴定了7个化合物。分别为:三七皂苷-R2(notoginsenoside-R2)(1)、人参皂苷Rf(ginsenoside Rf)(2)、金盏花苷E(calenduloside E)(3)、太白楤木皂苷Ⅳ(taibaienosideⅣ)(4)、太白楤木皂苷Ⅰ(taibaienosideⅠ)(5)、齐墩果酸(oleanicacid)(6)、人参皂苷Ro(ginsenoside Ro)(7)。其中化合物3、4和5为首次从该种植物中分离得到。上述研究成果完善了珠子参的化学成分，并为进一步活性研究提供了物质基础。 本论文利用MTT法研究了化合物1、2、3、4、5、7对人源肝癌HepG2细胞株、人源肺癌A549细胞株及人源宫颈癌Hela细胞株的体外抗肿瘤活性。结果表明，化合物3、4、5对HepG2、Hela及A549细胞的增值均有很强的抑制作用，而化合物1、2、7均无抑制作用。 基于前面的研究成果，我们采用荧光染色、透射电镜、流式细胞术及western blot等方法对化合物3（金盏花苷E）抑制人源肝癌细胞HepG2增殖机制进行了研究。金盏花苷E能够有效抑制HepG2细胞增殖，并呈浓度依赖效应和时间依赖效应，在24，48，72h后的IC50分别为0.06167，0.05546和0.05214μmol/ml。金盏花苷E处理过的HepG2细胞，变圆，数量减少;荧光染色后，观察其细胞核，出现凝缩和破裂;透射电镜下观察，细胞表面绒毛减少，线粒体发生肿胀，变圆，染色质浓缩成块状，边缘化凝集于核膜上，产生凋亡小体等。以上结果都说明HepG2细胞发生凋亡。通过流式细胞仪检测，金盏花苷E能够阻滞细胞周期于G2/M期，并能使凋亡细胞数量增加。金盏花苷E对HepG2细胞处理24h后，Procaspase-3，-8，-9均出现一定程度的活化，同时，Bcl-2的表达量明显增加，Bax的表达量明显减少，结果表明，金盏花苷E能够通过激活Caspase-3，-8，-9通路和线粒体途径，诱导细胞凋亡。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1 生药学研究

1．1 珠子参根茎横切面

1．2 珠子参根茎粉末

1．3 珠子参叶

2 化学成分研究

2．1 三萜皂苷类成分

2．2 其他类化学成分

3 珠子参药理作用研究

3．1 对免疫系统功能的影响

3．2 对神经中枢的影响

3．3 对血液和造血功能的影响

3．4 抗脂质过氧化作用

3．5 抗实验性溃疡作用

3．6 扩血管、降血压作用

3．7 抗炎作用

3．8 抗脑缺血

3．9 抗肿瘤作用

3．10 其他药理作用研究

4 珠子参提取及纯化工艺研究

4．1 皂苷类成分

4．2 多糖类成分

5 珠子参质量分析研究

6 珠子参种植、栽培研究

第二章 珠子参化学成分研究

1 化合物的结构解析

2 实验部分

2．1 实验仪器

2．2 实验材料

2．3 实验药材

2．4 化学成分提取与分离

2．5 化学成分结构鉴定

第三章 体外抗肿瘤活性研究

1 实验部分

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 实验结果

2．1 六种化合物对HepG2细胞增殖影响

2．2 六种化合物对Hela细胞增殖影响

2．3 六种化合物对A549细胞增殖影响

3 小结

第四章 金盏花苷E抑制人源肝癌细胞HepG2增殖机制研究

1 实验部分

1．1 实验材料

1．2 试验方法

2 实验结果

2．1 MTT法检测金盏花苷E抑制率

2．2 金盏花苷E对细胞形态的影响

2．3 荧光染色观察金盏花苷E对HepG2细胞核影响

2．4 电镜下观察金盏花苷E对HepG2细胞器影响

2．5 金盏花苷E对细胞周期的影响

2．6 金盏花苷E对细胞凋亡的影响

2．7 金盏花苷E对Caspase-3，-8，-9的影响

2．8 金盏花苷E对Bcl-2和Bax的影响

3 小结

结语

1 化学成分研究

2 抗肿瘤活性研究

参考文献

致谢

附录