重组葡激酶的蛋白质工程研究

摘要

重组葡激酶(r-Sak)是一种正在临床试用中的新型溶栓剂.该文运用X射线晶体衍射、计算机辅助分子模拟等方法建立了Sak、Sak·mplg、Sak二聚体的空间结构模型,结合功能信息合理设计新型Sak分子,并利用基因工程和蛋白质工程方法得到各种Sak突变体,高度纯化后用于各种理化和生物学性质研究,最终在保持Sak溶栓活性的前提下,得到了聚合能力弱、免疫原性低、分子量小的新型Sak突变体,并且能够显著抑制血小板聚集,具有溶栓抗栓双重功能.在已获得的新型重组葡激酶组合突变体Y<,1>-Sak高效表达菌的基础上,初步建立快速、简便、高效的中试工艺.人微小纤溶酶原mplg仅包含Plg的丝氨酸蛋白酶区,分子量较小,便于操作,且保留了Plg的活性区及与Sak的结合区,因此,我们选择mplg为简化的研究对象.我们应用毕赤酵母表达系统表达人微小纤溶酶原及其活性中心丝氨酸突变体,摇瓶表达水平可达300mg/L,培液中mplg的纤溶活性3-4天后达到高峰,而Mmplg未显示纤溶活性.

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分葡激酶结构与功能的关系及新型葡激酶衍生物的研制

第一节 低分子量新型重组葡激酶衍生物的研制

参考文献

第二节 低免疫原性新型重组葡激酶衍生物的研制

参考文献

第三节 低聚合能力兼具防栓功能的新型重组葡激酶衍生物的研制

参考文献

第四节 新型重组葡激酶组合突变体的研制

第二部分新型重组葡激酶组合突变体Y1-Sak的中试研究

参考文献

第三部分人微小纤溶酶原及其活性中心丝氨酸突变体在甲醇营养型酵母Pichia patoris中的表达

第一节人微小纤溶酶原及其活性中心丝氨酸突变体在毕赤酵母中的表达

参考文献

第二节 人微小纤溶酶原在毕赤酵母中的多拷贝表达及纯化

参考文献

综述部分1.葡激酶结构与功能研究进展

2.人纤溶酶原结构与功能研究进展

附录

致谢