c-erbB-2多克隆抗体的制备及作用于乳腺癌细胞的实验研究

摘要

该研究以重组的表达质粒PGEX-5X-1-c-erbB-2转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导使融合蛋白高效表达,经谷胱甘肽(Glutathione)Sepharose4B亲和层析柱和割胶法提纯,获得了纯化的c-erbB-2基因表达产物-融合蛋白GST-c-erbB-2;我们用此抗原制备兔抗血清,经rProteinGAgarose纯化获得IgG型多克隆抗体,又经GlutathioneSepharose4B亲和层析柱去除抗GST的抗体后获得抗c-erbB-2抗体;对此抗体进行了细胞表面特异识别、体外肿瘤细胞生长抑制、及诱导c-erbB-2阳性肿瘤细胞凋亡等多方面的功能研究.通过WesternBlotting和免疫组化检测,发现抗体可特异性识别重组表达蛋白、细胞表面c-erbB-2抗原,并与之结合;经ELISA检测发现c-erbB-2抗体经10<'-5>稀释后仍能与重组表达蛋白有效结合.通过MTT的方法,该研究检测了c-erbB-2抗体对肿瘤细胞的特异性杀伤作用.结果表明抗体对c-erbB-2阳性的人乳腺癌细胞SK-BR-3有特异性的杀伤作用,且呈剂量相关,而对c-erbB-2阴性的人乳腺癌细胞MCF-7则无明显作用.该研究对c-erbB-2抗体对肿瘤细胞凋亡的影响进行了初步探讨,证实了抗体有明显促进c-erbB-2阳性的乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的作用.该研究制备的c-erbB-2抗体对c-erbB-2阳性的乳腺癌细胞有特异性识别、抑制生长及促进凋亡作用.