染色体17p13.3缺失区内潜在肝癌相关基因HC71转录调控机制的初步探讨

摘要

HC71基因（基因数据库登陆号：AF177342,AF258545）是我们实验室在17号染色体短臂13.3位点（17p13.3）的杂合性缺失（LOH）区域内克隆到的重要基因之一.该基因全长50kb,含11个外显子,其cDNA长约1.8kb,具有三种剪接形式,可以编码三种蛋白质.为了探讨该基因在转录水平的基本调控机制,分析该基因的转录调控与肝癌发生的关系,该论文对HC71基因的转录调控进行了以下的研究.1）应用半定量RT-PCR的方法检测HC71基因在肝癌组织及癌旁组织中的表达水平;2）采用引物延伸法（primer extension）确定该基因的转录起始点;3）通过系统性的限制性内切酶酶切与连接扫描突变,构建一系列含有由该基因启动子的缺失或突变体控制的报告基因的质粒,通过瞬时转染与荧光素酶报告基因检测,初步分析了与该基因表达有关的启动子的关键序列;4）应用共转染以及电泳迁移率改变检测法（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）对该基因启动子所包含的重要的顺式元件以及有关的反式作用因子的性质作了初步的探讨.

目录

前言

材料与方法

基本的分子生物学实验

研究启动子的试管内实验

研究启动子的细胞内实验

结果

一、对HC71基因所进行的生物信息学分析

二、HC71基因在多种细胞株及肝癌，癌旁组织的表达情况

三、转录起始点的确定

四、HC71基因启动子的结构分析

五、电泳迁移忙改变检测法（EMSA）实验结果

讨论

小结

参考文献

致谢

综述

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