17p13.3高杂合缺失区所含的细胞生长抑制的候选基因C63R的功能及其蛋白伴侣的研究

摘要

C63R基因（GeneBank登录号：AF246287）是在肝癌高杂合性缺失（LOH）17p13.3区域内定位克隆到的一个重要基因.RT-PCR结果证实了C63R基因还有另两种剪切形式,分别利用了端粒方向的第19号外显子和第19-22号外显子;系列酶切缺失子的集落形成实验初步将C63R生长抑制功能区定位在其氨基酸顺序的159-307位残基之间,羧基端系列缺失子的集落形成实验结果中这段序列的丢失将引起2-3倍的克隆形成数,而内部缺失子的集落形成实验结果中这段序列的丢失将引起的2-3倍的克隆形成数,而内部缺失子中缺失了该区域后将会比全长多形成40﹪的克隆数.经生物学软件分析这段区域可能含有钙依赖型蛋白激酶2的底物位点和p85SH2的结合位点;利用酵母双杂交系统我们发现C63R蛋白可能与LMO2和Bcl-2蛋白结合,但体外结合实验中C63R蛋白与该两蛋白的结合结果呈阴性.另外,我们已经构建好了串联亲和纯化实验所需的质粒载体,并利用PCR方法得到了酵母同源重组所需的DNA片段,遗憾的是,在该文撰写时还未获得阳性的酵母重组子.

目录

前 言

第一部分肝癌相关候选基因：C63R基因的细胞生长抑制功能的初步研究

材料

方法

结果

讨论

第二部分第一节酵母双杂交筛选C63R的相互作用蛋白

引言

结果

小结

第二部分第二节In vitro Pull-Down实验验证C63R蛋白与LMO2及Bcl-2蛋白的结合

引言

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分第三节Tandem Affinity Purification(TAP)方法寻找酵母C63R同源蛋白的结合蛋白

材料

方法

结果

讨论

小结

参考文献

综 述

致 谢

声明