常见病原菌快速基因诊断系统的实验与临床研究

摘要

PCR技术的应用为临床诊断提供了快速和敏感的检测方法.基因芯片技术是新一代的基因诊断技术,其主要特点是快速、高效、敏感、经济,现已成为当今多学科交叉、综合的前沿研究热点.该课题利用细菌16S rRNA基因的一系列特点,设计合成PCR反应引物及部分细菌特异性探针,构建基因芯片,并利用芯片对细菌进行快速诊断作系统探讨研究.第一部分 细菌16S rRNA基因的扩增及应用 目的:利用细菌16S rRNA基因的结构特点,设计细菌16S rRNA基因扩增的引物,并判定引物的特异性与敏感性,利用其对细菌进行检测鉴定.方法:在细菌16S rRNA基因保守区设计所有细菌PCR反应的通用引物,通过对PCR反应条件的优化等措施,建立合适的PCR反应条件,通过对多种细菌DNA、2种病毒DNA及人血白细胞DNA进行扩增,利用琼脂糖凝胶电泳等检测方法确定引物的特异性及敏感性.第二部分 快速诊断基因芯片的构建 目的:利用细菌16S rRNA基因的特点,设计革兰阳性菌、革兰阴性菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌的特异性探针,构建成基因芯片,用于对细菌检测.方法:在细菌16S rRNA基因保守分别设计合成革兰阳性菌、革兰阴性菌的通用探针,在其可变区设计合成肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌的特异性探针,制备成基因芯片,通过对杂交条件的优化以获得最佳检测结果.用不同细菌的扩增产物检测所制备的芯片特异性及敏感性.第三部分 基因芯片的临床应用 目的:利用所制备的基因芯片,通过对临床标本的检测,探索其临床应用前景.方法:无菌采集临床标本,对标本进行常规培养及鉴定,同期利用设计合成的特异性引物对标本进行PCR扩增,对扩增结果以凝胶电泳检测进行初步判断有无细胞存在,再利用所制备的基因芯片进一步确定为何种原菌,并比较该方法与普通培养特异性及敏感性.

目录

前 言

材料与方法

结果

讨论

材料与方法

结果

讨论

材料与方法

结果

讨论

结 语

参考文献

致 谢

综 述

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