趋化因子和趋化因子受体在母-胎界面的表达及其生物学作用

摘要

该研究拟通过如下实验研究,以解析趋化因子及其受体在母-胎界面的生物学调控作用:1、早孕期绒毛细胞滋养细胞(VCT)和绒毛外细胞滋养细胞(EVCT)的分离、培养及鉴定.应用不同胰酶消化步骤,收集人早孕期绒毛细胞的VCT及EVCT并分别培养.应用倒置显微镜、扫描电镜观察VCT及EVCT的形态学特征;免疫细胞化学鉴定细胞来源及纯度.结果显示胰酶短期、温和消化获得的EVCT,可生长于Matrigel上,并表达特异性标志物c-crbB-2.延长消化时间、增加胰酶浓度获得的VCT,种植于塑料或玻璃培养器皿上,可聚集并融合形成合体滋养细胞.VCT不表达c-erbB-2.因此采用不同的胰酶消化及体外培养条件,可简便、快速获得高纯度人早孕期VCT及EVCT.2、趋化因子受体和配体在早孕期人滋养细胞的表达及其生物学功能.首先分离早孕期人滋养细胞,RT-PCR系统检测了18种趋化因子受体在滋养细胞的转录水平,并筛选选出普遍高水平转录的趋化因子受体(CXCR4,CXCR6).免疫细胞化学和免疫组化证实早孕期人滋养细胞可翻译CXCR4.MTT实验揭示外源给予及滋养细胞自分泌的SDF-1具有促滋养细胞增殖效应;而PD98059则能拮抗外源SDF-1的促增殖效应.Western blot证实SDF-1显著增加滋养细胞内ERK1/2磷酸化水平.该研究表明,早孕期人滋养细胞表达SDF-1/CXCR4,该趋化因子配体、受体对相互作用,诱导细胞内ERK1/2磷酸化,从而以自分泌、旁分泌方式促进滋养细胞增殖.3、早孕期人蜕膜CD56<'bright>CD16<'->NK细胞趋化因子受体表达及特异性募集机制.收集早孕期蜕膜组织,免疫磁珠分选CD56<'bright>CD16<'->NK细胞;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD56<'bright>CD16<'->NK细胞中18种趋化因子受体的转录水平,筛选出高表达趋化因子受体(即CXCR4及CXCR3).原位杂交及免疫组化分析CXCR4特异性配体SDF-1在早孕胎盘的定位表达;ELISA检测早孕滋养细胞培养上清液中SDF-1α的浓度水平.趋化试验研究重组人SDF-1α(rhSDF-α)及滋养细胞培养上清液对蜕膜CD56<'bright>CD16<'->NK细胞的趋化作用.研究结果表明人早孕期蜕膜CD56<'bright>CD16<'->NK细胞高水平转录CXCR4,而滋养细胞则表达并分泌CXCR4的配体SDF-1.SDF-1趋化、募集CD56<'bright>CD16<'->NK细胞至蜕膜局部,从而有助于形成蜕膜独特的免疫微环境;通过滋养细胞其他分子(如HLA-G)训导蜕膜NK细胞,以维持母-胎免疫耐受.4、HIV-1协同受体及相关趋化因子在人胎盘组织的表达及可能的作用.半定量RT-PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5 mRNA水平;免疫组化和免疫细胞化学检测早孕胎盘及原代培养滋养细胞CXCR4、CCR5蛋白表达.结果显示各孕期胎盘表达CXCR4及CCR5 mRNA;CXCR4蛋白定位于滋养细胞,而CCR5蛋白定位于绒毛基质中.研究表明滋养细胞同时表达CXCR4及SDF-1,SDF-1可能通过降调CXCR4而拮抗X4 HIV-1感染胎儿细胞;R5 HIV-1或许能通过滋养层裂隙感染CCR5<'+>基质细胞和/或Hofbauer细胞,从而发生子宫内垂直传播.

目录

英文缩略语

Abstract

前言

第一部分人早孕期绒毛和绒毛外细胞滋养细胞的分离、培养及鉴定

第二部分趋化因子受体和配体在早孕期人滋养细胞的表达及其生物学功能

材料和方法

结果

讨论

第三部分蜕膜自然杀伤细胞趋化因子受体的表达及募集机制的研究

第四部分HIV-1协同受体CXCR4、CCR5及相应配体在胎盘的表达

结论

参考文献

致谢

研究生期间发表和待发表的文章

综述

第一部分母-胎界面趋化因子及受体研究进展

第二部分独特的趋化因子配体、受体对：SDF-1/CXCR4

第三部分趋化因子对NK细胞生物学功能的调控作用

第四部分HIV-1垂直传播研究进展

参考文献

附录1

附录2

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